1、甘露醇，學名己六醇，可作為甜味劑在飼料中廣泛應用。生產甘露醇的方法主要有提取法、化學合成法、酶轉化法、微生物發(fā)酵法等。微生物發(fā)酵法因其可以提高甘露醇的產率并且能避免山梨醇等副產物的產生成
　　為甘露醇生產的主要趨勢。目前已經報道了多種微生物具有產生甘露醇的能力，包括霉菌、酵母菌和細菌，其中異型發(fā)酵乳酸菌為主要產生菌。明串珠菌作為異型發(fā)酵乳酸菌的一種，其合成甘露醇的代謝途徑是在甘露醇脫氫酶的作用下催化果糖生成甘露醇。
　　為了

2、研究明串珠菌中甘露醇脫氫酶的特性，使其更好地應用于甘露醇的生產，本實驗以假腸膜明串珠菌為研究菌株，從假腸膜明串珠菌中獲得甘露醇脫氫酶基因，并在大腸桿菌中獲得表達。結果顯示：以假腸膜明串珠菌基因組 DNA為模板，經PCR擴增出大量甘露醇脫氫酶目的基因，PCR擴增產物為l017 bp。將重組質粒 pETDuet-1-mdh轉入大腸桿菌 BL21（DE3）進行轉化并且通過SDS-PAGE分析重組蛋白是否成功表達，結果表明，蛋白表達的分子量約為

3、36.007 kDa，與期望的分子量大小一致，說明重組蛋白成功表達，且表達量較高。
　　為了優(yōu)化IPTG誘導甘露醇脫氫酶基因表達的條件，試驗以IPTG不同濃度、不同誘導時間和不同誘導溫度對重組甘露醇脫氫酶基因進行誘導表達。結果顯示：IPTG誘導甘露醇脫氫酶表達的最佳濃度為0.5 mM、最佳誘導時間為16 h、最佳誘導溫度為30℃。
　　為了進一步了解甘露醇脫氫酶的特性，實驗分別對甘露醇脫氫酶最適反應溫度、pH，熱穩(wěn)定性以及化

4、學抑制劑進行了測定。結果顯示：甘露醇脫氫酶最適反應溫度為30℃；最適反應pH值為7；加入Ca2+、尿素會促進酶反應，提高酶活性，但差別不大；加入Fe2+、Ba2+、Zn2+、Cu2+、Na+以及SDS酶活性受抑制，其中，Na+、SDS對酶活性的抑制作用較強；對酶在30℃-80℃熱處理10 min，其中，30℃、40℃處理后，酶活性損失25％左右，50℃酶活性損失32%，60℃酶活性損失47%、70℃處理后酶活性損失較嚴重，酶活性損失60