1、燈盞花素對(duì)缺血再灌注大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞凋亡的影響燈盞花素對(duì)缺血再灌注大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞凋亡的影響龔明玉1，張力2，杜超1，周曉慧1（1承德醫(yī)學(xué)院，河北承德067000；2承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院放療科，河北承德067000）［摘要］［摘要］目的：目的：研究燈盞花素(breviscapine)對(duì)在體大鼠缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制。方法：方法：40只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，缺血再灌注組（IR組），燈盞花素組。燈盞花素組大鼠于術(shù)前1

2、周分別腹腔注射不同劑量的燈盞花素（25，50mg.kg1.d1），另2組給等量生理鹽水。以左冠狀動(dòng)脈前降支穿線結(jié)扎法制備心肌缺血模型，松開(kāi)結(jié)扎線造成再灌注。采用AnnexinvPI雙染，流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞的凋亡情況；電鏡觀察各組大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果：結(jié)果：燈盞花素可明顯降低缺血再灌注大鼠心肌細(xì)胞的凋亡率（P＜0.05，P＜0.01），且較IR組心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷程度減輕。結(jié)論：結(jié)論：燈盞花素對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用

3、，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制心肌細(xì)胞凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)的?！娟P(guān)鍵詞】【關(guān)鍵詞】燈盞花素；細(xì)胞凋亡；心??；缺血再灌注；超微結(jié)構(gòu)EffectEffectofofBreviscapineBreviscapineAgainstAgainstMyocardialMyocardialIschemiaIschemiaReperfusionReperfusionononMyocardialMyocardialCellCellUltrastructureUltrast

4、ructureApoptosisApoptosisininRatsRatsGONGGONGMingyuMingyu，ZHANGZHANGLiLi，DUDUChaoChao，etetalal（1ChengdeChengdeMedicalMedicalCollegeCollege，HebeiHebeiChengdeChengde067000China067000China2DepartmentDepartmentofofRsdiationR

5、sdiationOncologyAffiliatedOncologyAffiliatedHospitalHospitalofofChengdeChengdeMedicalMedicalCollegeCollegeHebeiHebeiChengdeChengde067000China067000China）ABSTRACTABSTRACT:ObjectiveObjective:Toexpletheeffectmechanismofbrev

6、iscapineagainstmyocardialischemiareperfusioninjuryinrats.MethodsMethods:40SDratsweredividedintoshamoperationgroupischemiareperfusiongroupbreviscapinegroupromly.Ratsinbreviscapinegroupwereinjectedwithbreviscapine25、50mg.k

7、g1.d1respectivelypritoischemiareperfusion.othertwogroupsweregivenNSinsteadofbreviscapineequallyataweekbefetheoperation.Theischemiareperfusionheartmodelwasestablishedbyligatingtheleftanteridescendingbranchofconaryartery.A

8、poptosisofmyocyteswasdetectedafteroperationinallgroupsbyflowcytometrywithAnnexinⅤEGFPpropidiumiodiode(PI)staining.Theultrastructuralalterationswereobservedunderthetransmissionelectronmicroscopy.ResultsResults:breviscapin

9、ecoulddecreasetheoccurrencerateofmyocardialapoptosisduringischemiareperfusioninjuryobviously（P＜0.05，P＜0.01）Thedegreeofinjuringonultrastructuresofmyocardialcellinbreviscapinegroupisratheralleviatedthaninischemiareperfusio

10、ngroup.ConclusionConclusion:breviscapinemayprotectmyocardialcellsduringischemiareperfusioninjurytheprotectivemechanismmaybeobtainedbyinhibitingmyocardialapoptosis.KEYKEYWDSWDSbreviscapineapoptosisCardiomyocyteischemiarep

11、erfusionmyocardiacultrastructures心肌缺血再灌注可導(dǎo)致心肌細(xì)胞死亡凋亡在心肌細(xì)胞死亡中發(fā)揮了重要的作用[12]。細(xì)胞凋亡的多少?zèng)Q定著缺血再灌注心肌損傷的嚴(yán)重程度，有效抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生和發(fā)展，是促進(jìn)缺血再灌注后心功能恢復(fù)和減輕心肌致死性損傷的一條重要途徑。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)在引發(fā)缺血之前使用藥物預(yù)處理可減少缺血再灌注損傷縮小急性心肌缺血所致的梗塞面積[3]抑制缺血再灌注過(guò)程中心肌細(xì)胞凋亡和超微結(jié)構(gòu)損傷[4]。

12、燈盞花素具有活血化瘀，抗血小板凝集等多種作用，在臨床上有著廣泛的應(yīng)用，但它對(duì)缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制尚不清楚。本研究旨在觀察缺血再灌注后大鼠心肌細(xì)胞凋亡的特點(diǎn)和燈盞22心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變221假手術(shù)組：心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)變化輕微，粗細(xì)肌絲清晰可見(jiàn)，肌小節(jié)一致，肌原纖維明暗帶清楚，線粒體結(jié)構(gòu)正常，嵴排列規(guī)則。（圖５）22２缺血再灌注組：心肌細(xì)胞嚴(yán)重水腫，部分肌節(jié)周期性結(jié)構(gòu)破壞，肌絲斷裂、溶解，線粒體腫脹，嵴部分?jǐn)嗔?，染色質(zhì)濃縮邊集，

13、呈新月體樣改變。（圖６）22３燈盞花素組：較缺血再灌注組心肌纖維超微結(jié)構(gòu)損傷程度明顯減輕，多數(shù)心肌纖維仍腫脹，線粒體輕度腫脹，外膜完整，肌原纖維較規(guī)則。肌膜不平整，肌漿網(wǎng)輕度擴(kuò)張，凋亡細(xì)胞明顯減少。（圖７）３討論近年來(lái)，盡管再灌注治療方法迅速發(fā)展，包括溶栓、PCI及GABG，但急性心肌梗死死亡率仍很高，再灌注損傷是主要原因之一。因此，減輕再灌注損傷具有重要的臨床意義。心肌缺血再灌注損傷可以產(chǎn)生4種類型的心功能障礙：心肌頓抑、無(wú)復(fù)流現(xiàn)象、

14、再灌注心律失常和致死性再灌注損傷。研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡參與心肌缺血再灌注損傷過(guò)程[7]。抑制心肌細(xì)胞凋亡能夠減少缺血再灌注后的心肌梗死體積幾乎達(dá)到50%～70%，改善心功能[8]。因此抗凋亡對(duì)防治心肌缺血再灌注損傷具有十分重要的意義。為了防治心肌缺血再灌注損傷，人們進(jìn)行了多方面的研究。研究證實(shí)，有些中藥可保護(hù)缺血再灌注心肌且毒副作用較小[9，10]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用燈盞花素使缺血再灌注大鼠心肌細(xì)胞凋亡減少，超微結(jié)構(gòu)減輕，得到了與上述研究一致的結(jié)果

15、[11]。Kajstarn等[12]研究發(fā)現(xiàn)，梗塞后急速、大量的心肌細(xì)胞缺失是由壞死所致，而隨后心肌細(xì)胞的缺血性死亡則與凋亡有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)IR組在缺血邊緣區(qū)由于存在側(cè)枝循環(huán)和終末端動(dòng)脈吻合，心肌缺血缺氧的情況較輕，心肌受到的損傷程度較小，但卻觸發(fā)了內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶激活途徑，出現(xiàn)染色質(zhì)濃縮邊集，呈新月體樣改變的心肌細(xì)胞凋亡改變，與Kajstarn等研究結(jié)果一致。有研究表明[1315]，氧化應(yīng)激、鈣反常、炎癥反應(yīng)及細(xì)胞凋亡等均參與了心肌缺血再

16、灌注損傷，細(xì)胞凋亡是再灌注損傷發(fā)病機(jī)制中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。燈盞花素是國(guó)內(nèi)臨床上治療心腦血管疾病的常用藥之一，它是從中藥燈盞花中分離得到的黃酮類化合物現(xiàn)代藥理研究表明燈盞花具有擴(kuò)張血管、改善微循環(huán)、增強(qiáng)局部腦血流、抑制凝血因子Ⅳ活性、抑制蛋白激酶C移位激活、抗凋亡等作用[1617]。本實(shí)驗(yàn)超微電鏡顯示燈盞花素使缺血中心區(qū)心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷明顯減輕心肌細(xì)胞肌原纖維排列較整齊凋亡心肌細(xì)胞減少，流式細(xì)胞儀法顯示心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著低于IR組。不

17、同濃度燈盞花素對(duì)心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷和心肌細(xì)胞凋亡均有明顯的抑制作用且有隨濃度增高效果越顯著但達(dá)到一定濃度后保護(hù)作用就不再明顯提高。證實(shí)燈盞花素對(duì)缺血再灌注心肌細(xì)胞有保護(hù)作用，其機(jī)制可能通過(guò)抑制心肌細(xì)胞凋亡實(shí)現(xiàn)的。參考文獻(xiàn)：[1]KovacevicMSimicOJonjicNetal.Apoptosiscardiopulmonarybypass.JCardSurg200722:129.[2]FreudeBMastersTNRobicse

18、kFetal.Apoptosisisinitiatedbymyocardialischemiaexecutedduringreperfusion[J].JMolCellCardiol200032(2):197.[3]姜淑芳鞏曉興苗中云.白藜蘆醇對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].解放軍保健醫(yī)學(xué)雜志20079(1):34.[4]趙淑敏孔祥玉周健等.黃芪預(yù)處理對(duì)缺血再灌注大鼠心肌超微結(jié)構(gòu)的保護(hù)作用[J].中國(guó)臨床康復(fù)20059(