1、豬繁殖與呼吸綜合征是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起豬的烈性傳染病，在分類地位上屬于套式病毒目，動脈炎病毒科，動脈炎病毒屬，不分節(jié)段，有囊膜的單股正鏈RNA病毒。是能夠引起母豬繁殖障礙和新生仔豬呼吸癥狀的嚴重危害養(yǎng)豬業(yè)的一種重要病原。假型病毒是指一種反轉錄病毒的囊膜糖蛋白被另外一種病毒的囊膜蛋白所代替，而基因組仍保持反轉錄病毒本身的特性。帶有異源性病毒囊膜糖蛋白的假型病毒作為研究病毒的侵入模型是非常安全的，因為其僅能引起單循環(huán)感染，能夠獲得

2、異源性病毒的宿主范圍，因此便于研究病毒的侵入機制、組織嗜性、中和抗體分析以及受體的鑒定等。 目前，PRRSV分子生物學方面已進行的大多數(shù)研究都針對其主要結構蛋白，特別是針對囊膜蛋白GP5的研究，本實驗室也利用病毒假型技術成功構建了PRRSVGP5的MuLV假型病毒體系。但對PRRSV次要結構蛋白的研究相對較少，本試驗利用反轉錄PCR技術擴增了PRRSV次要結構蛋白GP2、GP3、GP4基因，并將GP2、GP3、GP4基因分別克隆

3、至真核表達載體pcDNA3.0中，構建含次要結構蛋白基因的真核表達質粒pcDNA-GP2、pcDNA-GP3、pcDNA-GP4，分別運用脂質體轉染方法共轉染293T細胞，以空載體pcDNA3.0轉染293T細胞作為陰性對照，以pcDNA-GP5（由本實驗構建并保存）轉染293T細胞作為陽性對照。48h后收獲轉染細胞，分別與PRRSV特異性多抗及FITC標記的羊抗豬二抗反應，經流式細胞儀檢測蛋白表達，結果表明，與陰性對照值0.7％相比，

4、陽性對照pcDNA-GP5的表達量是最高的，達到30.4％，GP2、GP3和GP4重組質粒僅得到少量表達，分別為4.9％、5.4％、7.6％。 用pcDNA-GP2、pcDNA-GP3、pcDNA-GP4分別與鼠白血病病毒（MuLV）病毒假型構建體系的兩種質粒pHIT60（包括MuLV的結構蛋白基因，即gag和pol）和pHIT111（為MuLV的基因組及報告基因LacZ）瞬時共轉染人胚腎細胞293T，48小時后收獲轉染細胞上清

5、液，超速離心濃縮上清液，利用PRRSV特異性多抗和辣根過氧化物酶標記的二抗通過Western-blot檢測，結果未能檢測到GP2、GP3、GP4在此濃縮液中表達，說明PRRSV次要結構蛋白不能整合到病毒粒子表面。通過轉染上清液感染Marc-145細胞和豬肺巨噬細胞（PAM）等不同的靶細胞，用缺乏囊膜蛋白和已經證實可以形成MuLV假型病毒的水泡性口炎病毒糖蛋白G（VSV-G）作陽性對照，結果未能檢測到報告基因LacZ在此轉染上清液中的表達