1、本研究以番茄(Lycopercicon esculentum Mill)栽培品種貴妃和碧嬌為試材,建立了體外繁殖無性系,比較了不同因素對番茄子葉、下胚軸、葉片和莖段外植體再生能力的影響,并對影響外植體轉化的因素進行了探討.利用農(nóng)桿菌LBA4404(pTSB)介導轉化,獲得了碧嬌轉果聚糖果糖基轉移酶(fructan fructosyl transferase)基因植株,轉化植株在Km50mg/L生根培養(yǎng)基中生根良好,Southern雜交呈

2、陽性,證明目的基因已經(jīng)整合到碧嬌基因組中.抗凍實驗、葉片電導率測定、多糖含量測定等實驗結果均證實果聚糖果糖基轉移酶基因在番茄轉化植株中已實現(xiàn)表達.本研究主要進展如下:1.通過分別誘導子葉、下胚軸、葉片和莖段外植體直接分芽,建立了番茄品種貴妃和碧嬌的體外無性繁殖的高頻再生系統(tǒng),其平均再生頻率均可達95％以上.2.在再生培養(yǎng)基中添加抗壞血酸(Vc)可以有效防止葉片和莖段切口的褐化現(xiàn)象,但添加濃度過高,會使外植體的再生能力降低.最適宜的抗壞血

3、酸添加濃度為50-100mg/L.3.在再生培養(yǎng)基中添加一定濃度的AgNO<,3>能促進外植體的再生和分化,并能有效促進不定芽的伸長生長.有效促進葉片外植體再生的AgNO<,3>添加濃度為1mg/L,莖段外植體為3mg/L.4.將LBA4404(pTSB)對貴妃和碧嬌兩個品種的轉化頻率進行比較,碧嬌的轉化頻率明顯高于貴妃,抗性愈傷組織誘導率為15.50％.碧嬌轉化的外植體再生出完整植株,轉化植株在添加Km50mg/L的生根培養(yǎng)基中生根良

4、好.5.Southern分析證明果聚糖果糖基轉移酶基因(FFT)已整合到碧嬌基因組上.6.進行試管苗抗凍實驗,-5℃時轉化植株和未轉化植株的生長狀況表現(xiàn)出較大差異,轉化植株的抗凍能力提高.7.對植株的葉片進行電導率測定,在一定低溫范圍內,轉化植株的電導率要明顯低于未轉化植株,轉化植株表現(xiàn)出較強的抗凍能力.8.表型分析可見,轉化植株在一定低溫范圍內表現(xiàn)出抗凍能力強于未轉化植株,而且可以正常生長和繁殖.9.通過提取番茄葉片、莖和果實的多糖,