1、目的：已有的研究表明人參皂甙Rb1對缺血性腦損傷具有神經保護作用，但這種神經保護作用機制尚不清楚，故本實驗探討人參皂甙Rb1神經保護作用是否通過增加膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(GDNF)的表達而促進神經組織的修復。 方法:Wistar健康成年大鼠250-300克；雌雄不限，大鼠腦缺血模型成功后隨機分為兩組：人參皂甙Rb1給藥組[再灌注后立即腹腔注射人參皂甙Rb1(40mg/kg)]與單純腦缺血再灌注組。正常組大鼠、假手術組各5只作

2、為對照組。線栓法阻斷大鼠大腦中動脈(middlecerebralartery,MCA)2小時后，分別再灌注3小時，12小時，1天，2天，3天，5天制備成各時間組，每組5只。在各時間點過量麻醉處死動物，經心灌注固定，取出腦組織制成石蠟切片或在各時間點過量麻醉，斷頭取腦組織放入-80℃保存，備用。逆轉錄—聚合酶鏈反應(RT-PCR)測定GDNFmRNA水平的變化，免疫組織化.學(immunohistochemistry,IHC)染色觀察GD

3、NF蛋白表達的改變及分布的特點。 結果：正常組與假手術組皮質區(qū)廣泛的GDNF(+)細胞，在其它腦區(qū)有較多的GDNF(+)～(++)細胞。單純腦缺血再灌注組：再灌注三小時，額頂皮質缺血周邊區(qū)廣泛GDNF(++)的細胞，紋狀體缺血周邊區(qū)有一些GDNF(++)細胞，同側下丘腦可見到少量GDNF弱陽性細胞。再灌注12小時，額項皮質缺血周邊區(qū)有一些GDNF(++)細胞，紋狀體缺血周邊區(qū)零星散在的GDNF(+)細胞。同側下丘腦未見到GDNF

4、陽性細胞。再灌注1天，GDNF(+)細胞僅存在于額項皮質缺血周邊區(qū)，紋狀體、下丘腦缺血周邊區(qū)均未見到GDNF陽性細胞。再灌注2天，額頂皮質缺血周邊區(qū)內彌漫分布著大量的GDNF(++)的細胞。紋狀體、下丘腦缺血周邊區(qū)可見少許GDNF(+)的細胞。再灌注3天，額頂皮質缺血周邊區(qū)GDNF陽性細胞數量明顯減少；紋狀體缺血周邊區(qū)有少量GDNF(+)的細胞。再灌注5天，缺血側紋狀體與下丘腦無GDNF陽性細胞，額頂皮質缺血周邊區(qū)有散在少量GDNF弱陽

5、性的細胞。整個再灌注過程中，GDNF陽性細胞數在3小時升高，12h與1d降低，2天又升高，隨后下降。各時間點GDNF陽性細胞數同2天組比較，差異具有顯著性(P＜0.01)。在人參皂甙Rb1給藥組，與單純腦缺血再灌注組同時間點比較，再灌注3小時額頂皮質缺血周邊區(qū)GDNF的陽性細胞數增多，染色增強。下丘腦偶見數個GDNF弱陽性的細胞。再灌注12小時額項皮質、紋狀體缺血周邊區(qū)GDNF的陽性細胞數繼續(xù)增多，染色增強，且同側下丘腦有較多的GDNF

6、弱陽性的細胞。再灌注1天，GDNF強陽性細胞數增多，主要位于視前區(qū)、紋狀體缺血周邊區(qū)。再灌注2天，額項皮質缺血周邊區(qū)GDNF強陽性細胞數明顯增多、染色增強。紋狀體、海馬、視前區(qū)、皮質杏仁核也有較多的GDNF中等陽性的細胞。再灌注3天，GDNF陽性細胞數增多，主要位于額項皮質缺血周邊區(qū)，但染色無變化。再灌注5天，GDNF陽性細胞數主要集中于雙側皮質，染色呈強陽性。統(tǒng)計學分析顯示，人參皂甙Rb1給藥組，GDNF陽性細胞數在各時間點顯著高于單

7、純腦缺血再灌注組(P＜0.01)。RT-PCR的實驗顯示，從凝膠上cDNA的亮度判斷，在單純腦缺血再灌注組，在3小時與2天組GDNFmRNA的.表達強于其它各時間點；在人參皂甙Rb1給藥組，48小時GDNFmRNA的表達強于其它各時間點。在人參皂甙Rb1給藥組和單純腦缺血再灌注組相比，從cDNA的亮度上看無明顯差異。 結論：1.腦缺血再灌注損傷后GDNFmRNA與蛋白表達在3小時與2天分別有兩個高峰。給予人參皂甙Rb1后，GDN

8、FmRNA與蛋白表達在2天達高峰。 2.單純腦缺血再灌注組和人參皂甙Rb1給藥組，GDNF陽性細胞數主要分布于額頂皮質缺血周邊區(qū)，其次為紋狀體缺血周邊區(qū)，缺血側下丘腦偶見到數個GDNF陽性細胞。 3.根據兩組間GDNF免疫組織化學(immunohistochemistry,IHC)染色強弱比較，給予人參皂甙Rb1后，在同一時間點，同一缺血周邊區(qū)GDNF陽性細胞數染色增強。對GDNF陽性細胞數統(tǒng)計分析顯示，人參皂甙Rb1給