1、目的：探討PRDXⅢ在不同級別膠質瘤組織中的表達水平以及在膠質瘤細胞凋亡中的作用。 方法：收集65例膠質瘤和10例正常腦組織標本，利用免疫組織化學方法檢測PRDXⅢ蛋白表達水平，利用Tunel法檢測細胞凋亡指數(shù)。收集29例膠質瘤和9例正常腦組織標本，利用RT-PCR法檢測PRDXⅢmRNA的表達水平，分析不同級別膠質瘤及腦組織相互間PRDXⅢ表達水平的差異以及與細胞凋亡指數(shù)間的關系。設計合成針對PRDXⅢ的siRNA，脂質體介導

2、轉染人U251多形膠質母細胞瘤細胞，RT-PER法檢測轉染后24小時PRDXⅢmRNA的表達水平，Western-blotting檢測轉染后48小時PRDXⅢ蛋白的表達水平，篩選出有效的干擾序列；流式細胞儀、DNAladder、PI染色檢測轉染后48小時U251細胞的凋亡狀況，MTI、檢測轉染后48小時U251細胞的生長抑制率。 結果：PRDXⅢ蛋白在正常腦組織、Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ級人腦膠質細胞瘤中表達陽性率分別為2/10(2

3、0％)、4/14(28.6％)、6/19(31.6％)、10/13(76.9％)、和16/19(84.2％)，Ⅲ級和Ⅳ級膠質瘤PRDXⅢ蛋白表達陽性率明顯高于正常腦組織和Ⅰ級、Ⅱ級膠質瘤。隨病理級別增高，PRDXIII蛋白表達強度也明顯增加(r=0.576，p=0.00)。正常腦組織、Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ級人腦膠質細胞瘤的凋亡指數(shù)分別為24.51±3.27％、18.90±2.69％、16.46±2.‘74％、9.90±3.17％和7.6

4、6±2.83％，隨著膠質瘤級別的增高，凋亡指數(shù)逐漸降低，差異有統(tǒng)計學意義(F=74.45，P=0.00)。在正常腦組織和膠質瘤中，PRDXⅢ蛋白表達陽性組的凋亡指數(shù)為10.29±4.87％，PRDXⅢ蛋白表達陰性組為19.07±4.64％，PRDXⅢ蛋白表達陽性組的凋亡指數(shù)明顯低于PRDXⅢ陰性組(t=7.99，P=0.00)。正常腦組織、Ⅱ級、Ⅲ級和Ⅳ級人腦膠質細胞瘤中PR.DXIIImRNA產(chǎn)物OD值與內參照B-actinOD值的比

5、值分別為0.48±0.12、 0.69±0.22、0.96±0.24和0.97±0.36，隨著膠質瘤級別的增高，比值逐漸增高，組間差異有統(tǒng)計學意義(F=8.17，P=0.00)。RT-PCR檢測示，空白對照組、空載體組和無關序列組PRDXⅢmRNA表達無明顯變化，干擾序列1、3使PRDXⅢmRNA的表達明顯降低，尤以干擾序列3的效果最顯著，對PRDXⅢmRNA表達的抑制率為76％。WesternBlotting結果顯示，空白對照組、空載

6、體組和無關序列組PRDXⅢ蛋白表達無明顯變化，干擾序列1、3對PRDXⅢ蛋白表達有明顯抑制作用，以干擾序列3作用最顯著，抑制率達到63.9％。DNA ladder 顯示干擾組出現(xiàn)明顯梯形電泳條帶，說明有較明顯的細胞凋亡，空白對照組，空載體組和無關序列組細胞未見明顯梯形電泳條帶。PI染色結果顯示空白對照組，空載體組和無關序列組細胞未見明顯凋亡，而干擾組細胞核的染色質高度濃染，部分細胞核裂解為碎塊，符合凋亡形態(tài)學的改變。FCM檢測結果顯示空

7、白對照組、空載體組、無關序列組和干擾組細胞凋亡率分別為2.26±0.64％、2.68±0.74％、3.54±0.62％和35.9±4.85％，干擾組細胞凋亡率明顯高于空白對照組、空載體組、無關序列組(P=O.00)。MTT檢測干擾組對U251細胞生長的抑制率為44.4％，明顯減慢了細胞生長。 結論:PRDXⅢ在膠質瘤中高度表達，表達強度隨著腫瘤級別的增高而增加，Ⅲ、Ⅳ級膠質瘤中PRDXⅢ表達的強度明顯高于Ⅰ，Ⅱ級膠質瘤和正常腦組