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文檔簡介
1、目的：探討小分子干擾RNA(siRNA)對宮頸癌細胞系SiHa細胞中VEGF-165的表達及細胞增殖的影響，對RNA干擾技術在腫瘤治療領域中應用的可能性進行初步探討，為下一步利用RNA干擾技術抑制腫瘤血管形成以及局部侵襲和遠處轉移提供研究基礎。 方法：體外化學合成針對VEGF-165的siRNA，用無靜默效應熒光標記siRNA在轉染試劑的介導下轉染SiHa細胞，熒光顯微鏡下監(jiān)測其轉染效率，篩選出siRNA和轉染試劑的最適宜轉染用
2、量。實驗分為3組，設未轉染細胞為空白對照組，VEGF-165特異性siRNA轉染的實驗組及無關序列siRNA轉染的陰性對照組。利用MTT法檢測SiHa細胞轉染后細胞增殖活性，熒光實時定量RT-PCR法分別檢測轉染12、24、48和72h后SiHa細胞中VEGF-165mRNA的表達情況，ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中VEGF-165蛋白分泌量的變化。 結果：VEGFsiRNA和HiPerFect Transfection Reag
3、ent的最佳質量體積比為75ng、4.5μl。VEGF-165siRNA轉染SiHa細胞后，各時間點與對照組相比VEGFmRNA表達水平明顯下降(F值分別為99.94、169.27、460.90、115.86，P<0.05)：VEGF蛋白分泌量明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(F值分別為107.06、136.46、147.10、54.25，P<0.05)；細胞生長較對照組明顯受到抑制(F值分別為70.58、61.17、113.39、100.9
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