1、瘢痕疙瘩是皮膚組織對創(chuàng)傷和/或炎癥反應所致的良性纖維組織的異常增生,常超出原創(chuàng)傷范圍向周邊的正常組織進行性侵入生長。特征是大量的成纖維細胞增生和過度的膠原沉積,嚴重者可影響美觀并導致局部功能障礙,目前多采用聯(lián)合治療的方法,但療效欠佳且有復發(fā)的可能。故對瘢痕疙瘩的形成機制和防治的研究一直是皮膚外科領域一個非常重要的課題。成纖維細胞可在體外穩(wěn)定培養(yǎng)且性狀穩(wěn)定是研究瘢痕疙瘩的發(fā)病機制和篩選有效藥物的良好模型。近年來研究發(fā)現(xiàn)己酮可可堿具有廣泛的

2、抗纖維化作用,而對瘢痕疙瘩的基礎研究卻少有報道,故本研究以己酮可可堿干預體外培養(yǎng)的瘢痕疙瘩及正常皮膚成纖維細胞,研究在不同濃度己酮可可堿作用下成纖維細胞增殖、轉化生長因子β1及Ⅰ、Ⅲ型前膠原基因表達的變化,通過本研究,初步探討瘢痕疙瘩的發(fā)病機制,為進一步將己酮可可堿應用于臨床提供實驗依據和更準確的使用方法。
　　 第一部分、人瘢痕疙瘩及正常皮膚成纖維細胞培養(yǎng)
　　 目的：學習和比較人瘢痕疙瘩及正常皮膚組織成纖維細胞的原代

3、培養(yǎng)技術,為進一步的研究提供實驗模型。
　　 方法：利用組織塊貼壁法分別培養(yǎng)人瘢痕疙瘩及正常皮膚成纖維細胞,以細胞計數法測定兩種成纖維細胞生長曲線。
　　 結果：成功培養(yǎng)、傳代、純化了人瘢痕疙瘩及正常皮膚成纖維細胞；瘢痕疙瘩成纖維細胞的數量倍增時間為46.4小時,正常皮膚成纖維細胞的數量倍增時間為54.8小時,兩者的增殖速度有明顯差異。
　　 結論：觀察和比較了人瘢痕疙瘩及正常皮膚成纖維細胞培養(yǎng)的全過程,獲得了大

4、量純化的人瘢痕疙瘩及正常皮膚成纖維細胞,并為進一步的細胞內干預實驗準備了物質基礎；瘢痕疙瘩組成纖維細胞的數量倍增時間較正常對照組明顯縮短,顯示其快速增殖的特點。
　　 第二部分、己酮可可堿對瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖、TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA表達的影響
　　 目的：研究不同濃度己酮可可堿對體外培養(yǎng)的人瘢痕疙瘩及正常皮膚成纖維細胞增殖、TGF-β1及Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA表達的影響,初步探討己酮可可堿防治瘢痕疙瘩的

5、作用機理,為其臨床應用提供實驗依據和更準確的使用方法。
　　 方法：取5～8代人瘢痕疙瘩及正常皮膚組織成纖維細胞為模型,加入不同濃度的己酮可可堿,利用MTT比色法檢測其對成纖維細胞增殖活性的影響；用雙抗體夾心ABC-ELISA法測定各個時段各孔上清液中TGF-β1的含量；采用RT-PCR方法檢測其對瘢痕疙瘩和正常皮膚成纖維細胞在Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA表達上的差別。
　　 結果：(1)己酮可可堿能明顯抑制瘢痕疙瘩及正常皮膚

6、成纖維細胞的增殖,濃度在0.1～2mg/ml范圍內呈明顯的量效-時效關系。當濃度2 mg/ml時其抑制率達到最高水平。但比較正常皮膚和瘢痕疙瘩成纖維細胞組間抑制率差異無顯著意義(P>0.05)。(2)與對照組相比,己酮可可堿0.25mg/ml作用96小時,己酮可可堿0.5、1.0和2.0mg/ml作用24、72、96小時后,正常皮膚成纖維細胞在TGF-β1的表達上差異顯著(P<0.01)。與對照組相比己酮可可堿0.25、0.5、1.0和

7、2.0(mg/ml)作用24、72、96小時后,瘢痕疙瘩成纖維細胞在TGF-β1的表達上差異顯著(P<0.01)。多因素方差分析顯示不同濃度、不同細胞來源差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)己酮可可堿作用前,瘢痕疙瘩組Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA表達均較正常皮膚組有明顯增加,差異顯著(P<0.05)；己酮可可堿作用后,能抑制正常皮膚和瘢痕疙瘩成纖維細胞Ⅰ、Ⅲ型前膠原mRNA表達,隨著濃度的增加,這種抑制作用更加明顯,濃度2mg/ml時抑制