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文檔簡介
1、目的:觀察丙酮酸乙酯(EP)對大鼠腎小球系膜細(xì)胞株(HBZY-1)MMP-9、ColⅣ表達的影響,并探討其可能的作用機制。
方法:體外培養(yǎng)HBZY-1,以不同濃度葡萄糖及不同時間作用HBZY-1,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法檢測MMP-9、ColⅣ mRNA表達;加入不同濃度EP、PDTC(NF-κB特異性抑制劑)及作用不同時間干預(yù),RT-PCR和免疫印跡法(western blotting)方法分別檢測MMP-9、Co
2、lⅣ mRNA和蛋白表達;細(xì)胞免疫熒光方法檢測NF-κB p65蛋白表達。
結(jié)果:(1)隨著干預(yù)葡萄糖濃度增加及作用時間延長,MMP-9 mRNA的表達下調(diào)(P<0.05),ColⅣ mRNA的表達上調(diào)(P<0.05),作用呈量效、時效關(guān)系。(2)加入不同濃度的EP、PDTC干預(yù)體外高糖培養(yǎng)HBZY-124h,MMP-9 mRNA和蛋白的表達逐漸增加(P<0.05),ColⅣ mRNA和蛋白的表達逐漸下降(P<0.05),EP
3、5mmol/L與10mmol/L MMP-9、ColⅣ表達相近,提示5mmol/L EP可能為其最佳作用濃度。(3)5mmol/L EP作用體外高糖培養(yǎng) HBZY-1不同時間(12-48h),隨著作用時間延長,MMP-9 mRNA和蛋白的表達上調(diào)(P<0.05),ColⅣ mRNA和蛋白的表達下調(diào)(P<0.05),作用呈時效關(guān)系。(5)高糖作用下NF-κB熒光信號從胞漿轉(zhuǎn)移到胞核,EP、PDTC阻斷了NF-κB信號的核轉(zhuǎn)位。
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