1、目的和意義：檢測全反式維甲酸（ATRA）誘導急性早幼粒細胞白血病（APL）細胞株NB4細胞分化前后miRNA 表達譜的變化，并利用生物信息學方法對其靶基因進行預測，選出和細胞增殖分化相關的miRNA，并進行功能研究，進而探討miRNA 在APL細胞分化中的作用。 實驗方法和結果： 第一部分，通過miRNA基因芯片檢測ATRA誘導NB4細胞分化前后各時間點的表達譜差異，利用miRNA數(shù)據(jù)庫預測篩選誘導分化中變化的miRNA

2、的靶基因。然后找出其中和增殖分化潛在相關的miRNA，并用TaqMan real-time PCR技術驗證其表達。miRNA芯片結果顯示：在ATRA誘導NB4細胞分化后，表達顯著上調的miRNA有8個，顯著下調的有15個。其中miR-146a在ATRA處理NB4細胞后表達量逐漸降低，而其潛在靶基因Smad4 mRNA和蛋白（TGF-β1/Smad信號轉導通路中公共調節(jié)型Smad）的表達呈逐漸上升趨勢。 第二部分，利用DNA重組技

3、術構建miR-146a表達質粒及含Smad43’UTR中miR-146a互補結合位點的報告基因重組質粒，與內參質粒pRL-TK共轉染293T細胞，測定相對熒光素酶活性，分析miR-146a和其潛在靶基因Smad4之間的作用關系。瞬時轉染結果顯示，實驗組相對熒光素酶活性明顯低于對照組，下降30.72％。miR-146a可抑制Smad4的轉錄激活，降低Smad4蛋白的表達。 結論：miRNA在全反式維甲酸誘導NB4細胞分化的信號傳導