1、中南大學博士學位論文基于MicrNA的鼻咽癌基因治療初步研究姓名：蔡鑫章申請學位級別：博士專業(yè)：耳鼻咽喉科學指導教師：趙素萍20070501中南大學博士學位論文中文摘要可以通過在經典的RNA干擾途徑降解靶基因mRNA、也可以直接抑制靶基因的蛋白翻譯、還可以通過快速脫腺苷化降解mRNA。miRNA已經被看作生物體內固有的基因調控子中最大的一個家族。本研究的目的是模擬天然miRNA構建表達miRNA前體的質粒，實現調控腫瘤相關基因——人端粒

2、酶逆轉錄酶(hTERT)基因和血管內皮生長因子(VEGF)基因的表達，開展對鼻咽癌的基因治療研究。整個研究內容分三部分進行：第一部分調控目標基因的miRNA表達質粒的構建和有效質粒篩選。目的是確定針對hTERT和VEGF基因的miRNA的有效作用位點，觀察構建的候選質粒對鼻咽癌中兩個靶基因的調控效應，為后續(xù)的體外和體內實驗奠定基礎。結果針對l肥RT和ⅦGF基因分別構建了3個質粒，每個基因各篩選出了1個有效質粒，分別是：pcDNA62GW

3、／EmGFPmiRhT2035、pcDNA62GW／EmGFPmiRV1025；并確定了2035～2055為hTERT的有效作用位點，1025～1045為VEGF基因的有效作用位點；將兩個有效質粒瞬時轉染CNE2細胞后，應用實時熒光定量RTPCR觀察到miRNA使h1ERT和VEGF基因的mRNA水平分別下調為773％和793％；應用Westernblotting觀察到兩個基因的蛋白表達分別下調732％和802％；應用CCK8細胞增殖抑