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文檔簡介
1、目的:分析成年豚鼠新皮質淺層細胞體外增殖和分化潛能,探討新皮質淺層存在成年神經發(fā)生的可能性。
方法:分離不同年齡段豚鼠不同部位腦組織,包括新皮質淺層、深層以及海馬腦組織,體外懸浮培養(yǎng)、擴增及傳代,比較不同年齡、不同部位組織來源的神經球樣細胞簇形成率的差異;用Nestin免疫熒光染色進一步檢測成年豚鼠皮質淺層分離出的細胞是否具有神經干/祖細胞的特性;去除生長因子后,用胎牛血清和NGF誘導成年豚鼠新皮質淺層神經干/祖細胞進行分化,
2、通過免疫熒光染色檢測神經元標記物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形膠質細胞標記物GFAP的表達;并應用膜片鉗技術對誘導分化后神經元的電生理功能進行檢測。
結果:所取的豚鼠腦組織細胞在體外可以形成集落樣生長的神經球,幾乎整個神經球均由Nestin陽性細胞組成,部分神經球細胞共表達GFAP。誘導分化后的細胞顯示不同比例的神經元標記物MAP-2、β-Ⅲ Tubulin和星形膠質細胞標記物GFAP染色陽性。膜片鉗檢測可見誘導分化
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