1、本實驗從污染的黑曲霉平板上分離到一株菌，該菌對黑曲霉有很強抑制效果。通過平板對峙法和牛津杯法檢測到了該菌的發(fā)酵液對各種植物病原菌如立枯絲核菌和水稻黃單胞菌等有很明顯的抑制效果。由此可知該菌在農業(yè)植物病防治和水果保藏方面有重要的應用價值。為進一步了解該菌，本論文通過分類學、生物信息學、分離純化和初步鑒定等技術對該菌進行了闡述，其研究內容如下:
　　1.從基因型特征上，確定了所分離獲得的菌株YL1為Bacillus velezensi

2、s。16S rDNA序列比對結果顯示:其與Bacillus velezensis CR-502相似度為99.85％。通過基因組中平均核苷酸一致性(ANI)比對發(fā)現:該菌株與Bacillus velezensis CR-502同源性為98.29％，確定該菌株與Bacillus velezensis CR-502為同一個種。由于菌株不同，將此菌株命名為Bacillus velezensis YL1。
　　2.獲得Bacillus ve

3、lezensis YL1全基因序列并預測其可能產生的抗生素。通過第二代基因組測序拼接獲得該菌株的基因組草圖，然后利用antismash網站對基因組進行分析，與已知的抗生素合成基因進行對比，預測其可能產生抗生素的基因和種類，對比發(fā)現該菌株基因組中含有完整合成Bacillibactin、Bacilysin以及聚酮類物質Bacillaene和Macrolactin的基因，還有一些基因與脂肽類Fengycin和Surfactin合成基因相似度很

4、高，另外還發(fā)現了一些未知產物如萜類和聚酮類的合成基因。
　　3.探索了發(fā)酵液中對水稻黃單胞菌有抑制作用的物質的性質。發(fā)現該發(fā)酵液產生的抗水稻黃單胞菌物質在100℃高溫下處理2h后活性并無明顯降低;當發(fā)酵液pH分別調至2-10的范圍內并處理4h后，其活性無較大變化:該發(fā)酵液內抗水稻黃單胞菌的物質對胰蛋白酶和胃蛋白酶不敏感。此外，該成分能溶于多種有機試劑，如甲醇、乙酸乙酯和乙腈，不溶于石油醚。
　　4.分離純化到了該菌產生的多種

5、抗生素。實驗先通過濃縮發(fā)酵液后用甲醇浸提蒸干后的發(fā)酵液，然后利用高效液相色譜(HPLC)確定活性物質的出峰時間:發(fā)現該菌并不只產生一種抗生素。進一步用乙腈萃取可將抗細菌的物質提取出來，然后利用HPLC進一步純化，得到純度較高的抗水稻黃單胞菌的活性物質;由于抗真菌物質極性較強，采用羥丙基葡聚糖（LH-20）凝膠柱對甲醇浸提物質進行了初步純化，再利用HPLC進一步純化，得到純度較高的活性物質。
　　5.確定了抗真菌抗生素為Surfac

6、tin。通過LC-MS測得抗真菌物質分子量為1044.56和1058.57，抗細菌物質的分子量為447.24。通過對基因組代謝產物的預測和自然產物詞典數據庫中比較推測:分子量為1044.56和1058.57分別為脂肽Surfactin的兩種衍生物;分子量為447.24的物質并未在基因組預測的物質中并未發(fā)現類似的分子量物質，天然產物數據庫中也未找到類似性質的物質，還需要進一步實驗確定。
　　上述研究為Bacillus velezen