1、目的：
　　本文擬通過鈣化模型在細胞水平研究三碘甲腺原氨酸(3，5，3'-Triiodothyronine，T3)在血管鈣化及血管平滑肌細胞(VSMCs)向成骨樣細胞表型轉化時相關蛋白及轉錄因子的變化和作用，并進一步明確T3調節(jié)血管鈣化及VSMCs向成骨樣細胞表型轉化的主要信導轉導通路，從而論證T3是抑制血管鈣化的重要內源性保護物質，為臨床調節(jié)和逆轉血管鈣化所致的動脈高壓相關疾病提供有效的實驗基礎。
　　方法：
　　體

2、外培養(yǎng)大鼠胸主動脈平滑肌細胞A7r5，將細胞隨機分為正常對照組、鈣化模型組（加入β-甘油磷酸鹽和氯化鈣培養(yǎng)基）、T3干預組（在鈣磷培養(yǎng)基中加入T3，根據(jù)濃度再分為10-7、10-8、10-9mol/L三個亞組）和抑制劑干預組，對細胞采用茜素紅染色檢測鈣化結節(jié)，細胞骨鈣素含量測定，ALP活性檢測，RT-PCR檢測Runx2和Osterix的mRNA含量，Western blot檢測骨化指標OPN、SM22α-actin和SMα-actin

3、及信號通路調節(jié)蛋白ERK1/2、P-ERK、Akt、P-Akt的表達水平，加入信號通路抑制劑后再次檢測Runx2和Osterix的mRNA含量以及OPN、SM22α-actin和SMα-actin的蛋白含量。
　　結果：
　　與正常對照組相比，鈣化組A7r5細胞的骨鈣素含量、ALP活性、Osterix和Runx2mRNA水平、OPN蛋白水平均顯著升高(P＜0.01)，SMα和SM22α蛋白水平顯著下降（P＜0.01）;加入T

4、3干預后細胞骨鈣素含量、ALP活性明顯降低，Osterix和Runx2mRNA、OPN蛋白表達明顯下調，而加入MMI后可阻斷以上T3的抑制效果;與鈣化組相比，抑制劑組Osterix和Runx2mRNA、OPN蛋白表達顯著升高(P＜0.01)。鈣化組可檢測到信號通路調節(jié)蛋白ERK1/2、P-ERK、Akt、P-Akt的表達增加，加入整合素αvβ3/ERK阻斷劑(PD98059)、PI3K/Akt拮抗劑(LY294002)后，再用T3進行干

5、預，抑制鈣化的效果依然存在，但與單純加抑制劑組相比無統(tǒng)計學差異，兩組間比較提示LY294002的抑制效果較PD98059明顯(P＜0.01)。
　　結論：
　　1、鈣磷培養(yǎng)液誘導A7r5細胞12天可成功構建鈣化細胞模型。
　　2、T3可降低A7r5鈣化細胞的鈣沉積及堿性磷酸酶活性，此效應呈濃度依賴性，說明T3是調節(jié)血管鈣化的內源性保護物質。
　　3、T3上調平滑肌細胞標志分子SM22α和SMα，使骨相關蛋白OPN

6、的表達增加，同時檢測到骨分化的重要轉錄因子Runx2和Osterix的mRNA水平下降，而加入T3拮抗劑MMI后，上述T3抑制鈣化的效果被部分拮抗，說明T3通過抑制血管平滑肌細胞表型轉化這一關鍵環(huán)節(jié)來調節(jié)血管鈣化。
　　4、鈣磷誘導A7r5細胞鈣化過程中可檢測到信號通路調節(jié)蛋白ERK1/2、Akt的活化，加入相應的抑制劑后表型轉化特異性轉錄因子Osterix和Runx2mRNA的表達均有所下調，隨著抑制劑濃度的升高骨分化蛋白OPN