1、多能干細胞(PSC)定向分化為造血干細胞(HSC)的研究為解決“血荒”、移植供者來源不足以及開拓血液制品來源提供了新途徑。iPSC技術(shù)的出現(xiàn)又避免了人ESC應(yīng)用涉及的法律、倫理道德等問題，更重要的是，病人特異的iPSC來源的HSC在移植后可避免免疫排斥反應(yīng)，為實現(xiàn)個體化的再生醫(yī)學開辟了新方向。如何體外誘導(dǎo)人多能干細胞分化為可長期移植的造血干細胞和功能性的成熟血細胞是目前最大的挑戰(zhàn)。本研究從造血微環(huán)境中一重要成員骨髓間充質(zhì)干細胞著手，尋找

2、MSC促成骨分化的轉(zhuǎn)錄因子，并闡明ETV6在骨髓MSC分化和人多能干細胞造血分化中的作用，為促進體外人多能干細胞向功能性造血干/祖細胞分化提供新的方案。
　　第一章TEL/ETV6對骨髓間充質(zhì)干細胞成骨成脂分化的調(diào)控作用研究
　　成骨細胞對造血微環(huán)境以及造血干細胞的維持與穩(wěn)定至關(guān)重要，因此，通過調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化并作為基質(zhì)可能有助于體外人能干細胞分化來源的造血干/祖細胞成熟。本章節(jié)通過大量篩選促進骨髓間充質(zhì)干細胞成

3、骨細胞分化的轉(zhuǎn)錄因子，發(fā)現(xiàn)了ETV6、ETV2和LMO2三個基因可以很大程度地促進成骨分化，而ETV3、GATA1和HOXB4則有相反的作用。我們進一步研究還發(fā)現(xiàn)ETV6通過調(diào)控骨髓MSC成骨成脂分化過程中的重要基因，包括RUNX2、MSX2等，來實現(xiàn)對MSC分化的調(diào)控。而且ETV6是成骨成脂分化所不可缺少的，一旦缺失會阻滯MSC的分化。最后，本研究還發(fā)現(xiàn)ETV6過表達的骨髓間充質(zhì)干細胞具有更大的造血干細胞支持作用，為以后HSC的體外擴

4、增和體外多能干細胞造血分化提供實驗依據(jù)。
　　第二章TEL/ETV6在誘導(dǎo)性多能性干細胞向造血細胞分化中的作用
　　TEL/ETV6基因突變和染色體異位常見于白血病，因此一直被認為是造血干細胞一個重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。但是目前為止關(guān)于TEL/ETV6基因在人造血干細胞生成過程中的作用及其調(diào)控機制尚不清楚，是否有助于體外多能干細胞造血分化研究也不明確。本章通過優(yōu)化首先建立了一種新的穩(wěn)定高效的體外人多能干細胞向造血細胞分化體系，并

5、利用CRISPR/Cas9技術(shù)在人誘導(dǎo)性多能細胞上將ETV6敲除，進一步研究ETV6在造血分化過程中的作用。本課題證明ETV6不是iPS的多能性維持所需要，而且發(fā)現(xiàn)ETV6的敲除對hiPSC到造血干/祖細胞分化階段沒有影響，但是在造血干/細胞向巨核細胞成熟分化這一過程中起到了關(guān)鍵的作用，ETV6敲除后嚴重阻礙了CD34+CD45+造血干/祖細胞向巨核細胞的分化。而且，我們也通過ETV6過表達的骨髓MSC與iPSC混合后誘導(dǎo)造血分化，從另