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簡介：目的通過以慢性乙型肝炎CHRONICVIRALHEPATITISB，CHB患者為研究對象，檢測分析血清前S1PRELIMINARYS1，PRES1抗原與血清中乙肝病毒脫氧核糖核酸HEPATITISBVIVASDEOXYRIBONUDEICACID，HBVDNA及與外周單個核細胞PERIPHERALBLOODMONOUCLEARCELLS，PBMC中HBVDNA它們之間的相關性，旨在尋找有助于評判反應乙肝病毒HEPATITISBRIVAS，HBV在機體免疫細胞中復制程度的指標；進一步通過對CD4、CD8T亞群的數量的檢測，觀察機體免疫損傷的程度，以評價PRES1抗原檢測反應HBV在機體免疫細胞內復制及造成免疫損傷的臨床應用價值。方法隨機選取于2008年3月至8月，在寧夏醫(yī)科大學附屬醫(yī)院感染疾病科門診及住院部治療的CHB患者108例，及門診體檢健康對照者30例，分離出血清及PBMC備用。用酶聯免疫吸附法ENZYMELINKEDIMMUNSBENTASSAY，ELISA檢測108例CHB患者血清PRES1抗原，用熒光定量聚合酶鏈反應FLUESCENTQUQNTITYPOLYMERASECHAINREACTION，FQPCR技術檢測血清和PBMC中的HBVDNA，同時采用流式細胞儀技術F1OWCYTOMETRY，FCM檢測所有受檢患者及健康對照者T細胞亞群情況后，做統(tǒng)計學分析。結果1PRES1抗原反應HBV復制的診斷敏感度897％、準確性917％均優(yōu)于乙肝E抗原HEPATITISBEANTIGEN，HBEAG。2PRES1抗原陽性率與血清和PBMC中HBVDNA均存在關聯X2血清7519，X2PBMC4779，P結論1PRES1抗原反應HBV復制的的檢驗效能優(yōu)于HBEAG。2血清PRES1抗原與血清HBVDNA及PBMC中HBVDNA的存在和復制密切相關，PRES1可反映HBV在機體免疫細胞中復制的程度，反應機體免疫損傷的情況。3慢性乙肝患者人體內發(fā)生T細胞免疫紊亂HBV感染PBMC后隨著PBMC內HBVDNA復制增加，可進一步加重T細胞功能的紊亂影響其免疫功能。所以HBV可感染PBMC，PRES1抗原檢測可以反映CHB患者細胞免疫損傷程度，可作為診斷乙型肝炎、反應HBV復制及感染PBMC的一個敏感指標，慢性乙肝患者PRES1抗原、血清和PBMC中HBVDNA的聯合檢測可對于乙肝患者的病情判斷、臨床治療的評價提供可靠依據。

簡介：本研究采用鑲嵌圖形測驗EFT、情感量表，測查了青島大學198名大學生的認知方式、正性情感和負性情感，通過對大學生正性情感和負性情感的統(tǒng)計分析，探討現代大學生的情感特征，并對大學生場認知方式與正性情感和負性情感之間的相互關系進行分析。本研究結論如下1、大學生的認知方式在年級、學科、是否獨生子女方面差異顯著。一年級學生、理科學生、獨生子女的認知方式傾向于場獨立性，四年級學生、文科學生、非獨生子女的認知方式傾向于場依存。2、大學生的情感在性別、年級、生源地、是否獨生子女方面差異顯著。男生的負性情感得分高于女生，四年級學生比一年級學生存在更多的負性情感，來自城市的大學生比來自農村的大學生負性情感得分低，獨生子女大學生的快樂感高于非獨生子女大學生。3、大學生的EFT分與負性情感和快樂感有顯著相關，場獨立的學生正性情感分數顯著高于場依存學生，場獨立的學生比場依存的學生體驗到更多的快樂感，而場依存的學生比場獨立的學生體驗更多的負性情感。

簡介：目的應用酵母雙雜交法檢測乙型肝炎病毒（HBV）X蛋白（HBX）與HDAXX的相互作用，并初步探討其相互作用后對細胞凋亡的影響，為進一步研究HBX在HBV慢性感染致癌機制中的作用提供一定的實驗依據。方法1構建酵母菌真核表達載體PGADT7HBX根據已知的HBVX基因序列，采用PRIMERPREMIER50軟件設計一對引物，并分別引入ECI與XHOI酶切位點，PCR擴增X基因；用ECI和XHOI分別雙酶切PCR產物和質粒PGADT7，分別純化回收酶切產物，T4連接酶連接后，轉化大腸桿菌DH5Α，篩選陽性克隆。對重組質粒進行酶切及測序鑒定。2構建酵母菌真核表達載體PGBKT7HDAXX用ECI和SALI分別雙酶切質粒PGBDUC1HDAXX和PGBKT7，分別純化回收酶切產物，T4連接酶連接后，轉化大腸桿菌DH5Α，篩選到陽性克隆后，對重組質粒行酶切鑒定。3酵母雙雜交檢測HBX與HDAXX的相互作用將酵母菌真核表達載體及酵母菌陰性陽性對照質粒分4組轉化酵母菌AH109，A組為PGADT7和PGBKT7、B組為PGADT7HBX和PGBKT7HDAXX、C組為PGADT7T和PGBKT7LAM、D組為PGADT7T和PGBKT7P53，將轉化菌落接種于SDTRPLEU（二缺）固體平板，30℃培養(yǎng)2～4D。將單個菌落接種于SDTRPLEUHIS（三缺）和SDTRPLEUHISADE（四缺）平板，30℃培養(yǎng)2～4D。裂解酵母菌，提取蛋白，經SDSPAGE、WESTERNBLOT檢測HDAXX和HBX在酵母中的表達。4流式細胞術檢測細胞凋亡將HBVX基因穩(wěn)定轉染入HEPG2細胞即HEPG2X，再瞬時轉染15ΜG、30ΜG和45ΜGPCDAN31HDAXX，以PCDNA31＋轉染HEPG2X組和HEPG2X組分別作為對照。用10MMOLL的5氟尿嘧啶5FU處理36H后分別收集各組細胞，經75％的乙醇4℃固定過夜，PI染色后，用流式細胞儀檢測各組細胞的凋亡率。用統(tǒng)計軟件SPSS130對實驗數據進行LSDT檢驗分析。結果1PCR擴增HBVX基因片段（465BP），將X基因克隆至PGADT7載體上，經雙酶切及測序分析，所克隆的目的片段與已知的X基因序列及GENEBANK上公布的HBVX基因（PUBMEDNC_U95551）序列完全一致。2將PGBDUC1HDAXX上的HDAXX基因片段亞克隆至PGBKT7載體上，經雙酶切分析，得約22KB大小的HDAXX基因片段，與預期值大小一致。3分4組轉化的酵母菌AH109在二缺陷平板上均可長出白色菌落，但僅有B、D兩組菌可以在三缺和四缺平板上生長，選取B組四缺陷平板上單個菌落，提取酵母蛋白，WESTERNBLOT檢測到HDAXX和HBX在同一株酵母菌株中均有表達。4將X基因穩(wěn)定轉染入HEPG2細胞，WESTERNBLOT檢測到HBX在HEPG2X細胞中的表達。經流式細胞術檢測，HEPG2細胞用5FU處理后凋亡率明顯高于未經5FU處理的細胞組，結果具有顯著性差異（P001）；HEPG2X組細胞凋亡率明顯低于空細胞組，結果具有顯著性差異（P001）；而轉染PCDAN31HDAXX后，細胞凋亡率進一步降低，但與轉染入的PCDAN31HDAXX量沒有劑量依賴關系。結論1成功地構建了PGBKT7HDAXX和PGADT7HBX酵母菌真核表達載體，并可在酵母菌AH109中表達。2HBX與HDAXX在酵母細胞內存在相互作用。3構建了穩(wěn)定表達HBX的細胞株HEPG2X。4HBX可抑制5FU誘導的HEPG2細胞凋亡，而HDAXX的高表達能提高HBX的抑制作用，使細胞凋亡率進一步降低。

簡介：空心蓮子草ALTERNANTHCRAPHILOXEROIDESMARTGRISEB為莧科AMARANTHACEAE蓮子草屬ALTERNANTHERA多年生宿根草本植物，具有清熱解毒、涼血利尿的功效。用于治療蕁麻疹、流行性感冒等病毒性疾患。本實驗室前期研究確定了空心蓮子草的乙酸乙酯提取物為抗病毒活性部位。為了進一步詮釋空心蓮子草抗病毒物質基礎及為其開發(fā)應用提供依據，本論文對該藥用植物的乙酸乙酯部位抗病毒化學成分及藥材質量分析進行了相關研究。采用色譜法對空心蓮子草抗病毒有效部位的化學成分進行了分離和鑒定從中分離到10個單體成分，鑒定了8個化合物，分別為分別為Β谷甾醇ΒSITOSTEROLⅠ，Α菠甾醇ΑSPINASTEROLⅡ，熊果酸URSOLICACIDⅢ，芫花素GENKWANINⅣ，大豆素DAIDEINⅤ，槲皮素QUERCETINⅥ，布盧姆醇ABLUMONOLA，30ΒD吡喃葡萄糖醛酸基齊墩果酸280ΒD吡喃葡萄糖酯OLEANOLICACID30ΒDGLTLCURONOPYRANOSYL280ΒDGLUCOPYRANOSIDEⅨ，其中Ⅳ，Ⅴ為首次從該植物中分離得到的化合物。在抗人流感病毒H3N2藥理試驗的跟蹤下，采用色譜法對空心蓮子草乙酸乙酯提取部位進行了抗病毒活性成分分離和篩選研究。乙酸乙酯提取物經硅膠柱分離，以氯仿甲醇梯度洗脫，其中氯仿甲醇73洗脫物作用較強。從中分離得到化合物Ⅶ抗人流感病毒效果明顯，化合物Ⅴ對人流感病毒有一定抑制作用同時，對本實驗室前人從空心蓮子草中提取分離出的化合物N反式阿魏?；野?、二十四烷酸、齊墩果酸進行了抗乙肝病毒藥理實驗，結果顯示三種化合物對乙肝病毒均有不同程度的抑制作用，其中以N反式阿魏?；焕野房挂腋尾《咀饔幂^強。以抗乙肝病毒有效成分N反式阿魏酰基酪胺為指標，采用HPLC分析方法建立了該藥用植物含量測定的方法。采用高效毛細管電泳色譜法對空心蓮子草藥材進行了指紋圖譜研究，建立了該藥材的指紋圖譜，色譜峰分離度好，相似度符合規(guī)定，方法可靠性強；通過對不同產地陸生環(huán)境空心蓮子草樣品的HPCE色譜圖比較，標定了18個共有峰對不同產地水生環(huán)境空心蓮子草樣品進行了HPCE色譜圖測定，標定了18個共有峰，結果表明，水生境空心蓮子草指紋圖譜中色譜峰的數量較陸生環(huán)境空心蓮子草多。從而為探討該藥用植物的品質與生態(tài)的關系提供了依據，也為該藥用植物建立與國際接軌的質量評價方法提供了參考依據。

簡介：邊緣性人格障礙（BDERLINEPERSONALITYDISDER，BPD）已受到西方精神衛(wèi)生界的普遍關注，是目前人們的一個主要的心理健康問題。許多研究認為情緒調節(jié)困難障礙是BPD的核心病理。國外有關BPD情緒失調的研究很多，但主要是用問卷探討情緒失調對BPD患者的影響，以及用實驗方法尋找BPD患者情緒失調的證據。目前，還沒有從情緒調節(jié)方式上探討可以改善患者情緒失調障礙的有效方法，也沒有用實驗的方法探討不同的情緒調節(jié)方式對BPD患者的影響。本研究以醫(yī)院和高校心理咨詢中心的BPD患者為研究對象，目的是探討不同的情緒調節(jié)方式對BPD患者的影響機制，找到可能改善BPD患者情緒失調障礙的有效的調節(jié)技能。研究采用心理生理測量法，測量被試觀看電影片段的主觀體驗變化和生理反應變化。研究結論如下1BPD組被試觀看中性情緒片段1的悲傷和痛苦情緒高于控制組。2負性情緒片段2能激起負性情緒。BPD患者的情緒反應比控制組高。在觀看負性情緒片段2時，BPD組的主觀體驗（恐懼和緊張）和生理喚起（SCR）變化高于控制組。3負性情緒片段3能激起負性情緒。認知重評能緩解BPD被試的負性情緒反應。在負性情緒片段3的觀看階段，與情緒抑制組相比，認知重評組的主觀體驗（恐懼和緊張）和生理喚起（HR）更低。4在觀看負性情緒片段3之后的恢復階段，認知重評相對于情緒抑制能使BPD被試的負性情緒恢復得更快。即認知重評組的負性情緒體驗和生理喚起仍然比情緒抑制組低。

簡介：中圖分類號UDCR75825610碩士學位論文學校代碼Q33密級坌玨147例藥物性皮炎的臨床資料分析及相關病毒的檢測CLINICALANALYSISANDDETECTIONOFRELATEDVIRUSESIN147DERMATITISMEDICAMENTOSAPATIENTS作者姓名尹用星學科專業(yè)臨床醫(yī)學研究方向皮膚病與性病學學院系、所湘雅二醫(yī)院指導老師肖嶸教授論文答辯日期答辯委員會主席中南大學二O一三年五月147例藥物性皮炎的I晦床資料分析及相關病毒的檢測摘要目的收集并分析147例住院的藥物性皮炎患者臨床資料，觀察藥物性皮炎患者人皰疹病毒肌6、HHV7、EBV、CMV及細小病毒PVBL9的感染狀況。方法1收集2010年9月到2013年3月入住我院的藥物性皮炎患者及正常對照者的血清；2采用酶聯免疫吸附法檢測血清中HHV6、HHV7、EBV、CMV及PVBL9抗體；3分析藥物超敏反應綜合征DIHS患者、重癥藥疹患者、非重癥藥疹患者及正常人病毒感染的差異；4對藥物性皮炎患者的年齡、性別、藥疹類型、致敏藥物、臨床特點等與病毒感染進行相關分析，并將病毒感染與部分臨床資料進行綜合分析。結果1、DIHS組、重癥藥疹組、非重癥藥疹組患者性別無顯著差異；重癥藥疹組患者的發(fā)病平均年齡比非重癥藥疹組高。2、我院住院藥疹患者中，以抗生素、抗癲癇藥及抗痛風類藥物為主要致敏藥物。3、我院住院藥疹患者中，EE、SJS、DIHS三種藥疹最常見，約一半屬于病情嚴重的重癥類藥疹。4、DIHS常見的致敏藥物依次為抗生素、抗癲癇藥及非甾體類藥物；重癥藥疹常見致敏藥物分別為抗癲癇藥、抗痛風藥及抗生素；非重癥藥疹最常見致敏藥物為抗生素。5、DIHS組、重癥藥疹組、非重癥藥疹組在潛伏期、發(fā)熱、肝功能損害等方面具有顯著差異；重癥藥疹組在腎功能損害發(fā)生率上比DIHS組及非重

簡介：心理治療通過建立特殊的人際關系運用心理學的理論指導在實踐中對特定人群的心理需求進行相關調整。心理治療的發(fā)展在某種意義上伴隨著近一個世紀人類社會重大變革。人類社會中越來越多的個體由于難以適應這種變化，產生諸多不同于以往環(huán)境中的心理問題，而解決相關心理問題的需求則漸漸成為心理治療成熟發(fā)展的根本動力。心理治療經歷了精神分析、行為主義、人本主義三大理論流派的洗禮發(fā)展趨向于流派間的整合，整合的優(yōu)勢在于增強心理治療的適用范圍和療效。我國的心理治療起步較晚但發(fā)展迅猛在借鑒國外優(yōu)秀療法的同時也涌現出相當數量的本土療法對于本土療法的思考與總結勢必能為提高國內心理治療整體水平做出添磚加瓦的貢獻。積極認知行為療法是中國學者在心理治療本土化進程中的成果。從理論基礎上看積極認知行為療法沿用認知行為療法的基本假設心理疾病的發(fā)生發(fā)展與環(huán)境因素、認知因素以及行為因素密切相關認知因素包括個體的思維、信念等對行為、情緒有決定作用因此改變相應認知因素成為治療的關鍵。在此基礎上積極認知行為療法融入了互補于傳統(tǒng)臨床心理學的積極心理學思想強調包括潛在積極力量、積極行動等積極因素在心理治療中的巨大作用。從操作程序上看積極認知行為療法以四個階段和六個核心的治療程序作為指導適用于中國醫(yī)療機構對心理疾病患者的診斷與排查程序也符合心理治療進程的一般規(guī)律。盡管相關治療記錄和技術的運用與認知行為療法有相似之處但始終強調積極因素的挖掘與利用而非認知行為療法中的教育方式。從科學性問題上看積極認知行為療法是科學的認知行為療法在一個方向上的發(fā)展其理論假說、操作程序都符合科學性的標準同時也在適用范圍內取得顯著療效。

簡介：第一部分目的構建含有鼠胰島素樣生長因子1IGF1基因的重組腺病毒，并轉染鼠胰島Β細胞標準細胞株RINM5F細胞，研究RIGF1對鏈脲佐菌素STZ誘導大鼠胰島Β細胞損害的保護作用及其作用機制，為基因治療糖尿病提供理論依據。方法從大鼠肝臟組織提取目的基因RNA，RTPCR轉錄及擴增產物DNA，并進行純化。分別用限制性核酸內切酶BGLⅡ和ECV雙酶切消化目的基因片段和穿梭載體PADTRACKCMV，定向亞克隆到PADTRACKCMV質粒上，1TSS法轉化ECOLIDH10B菌，篩選重組PADTRACKCMVRIGF1質粒。在ECOLIBJ5183菌中構建重組子。重組質粒轉染293細胞進行擴增。同樣方法包裝擴增不含目的基因的空腺病毒載體，作為病毒載體對照。快速腺病毒感染性滴度檢測試劑盒測定病毒滴度。重組腺病毒轉染RINM5F細胞，ELISA和WESTEMBLOTTING檢測RIGF1表達；STZ誘導細胞破壞，檢測培養(yǎng)上清中NO水平，胰島素釋放實驗進行功能測定，流式細胞檢測細胞凋亡，四甲基偶氮唑鹽法檢測細胞存活率。采用SPSS130統(tǒng)計分析軟件對結果進行分析。結果目的基因RTPCR產物經瓊脂糖凝膠電泳得到406BP特異性RIGF1電泳條帶，并成功構建了含有RIGF1基因的重組腺病毒，病毒滴度為10109PFUML，腺病毒空載體滴度為80108PFUML。RIGF1在轉染RINM5F細胞16H后可觀察到細胞內的綠色熒光，表明轉染成功，RIGF1有效表達。STZ誘導后，正常組和ADEGFP組胰島素釋放量較對照組明顯降低P結論胰島Β細胞局部表達IGF1能夠保護細胞功能，抑制NO產生，使胰島Β細胞免受誘導凋亡因子的損害，提高細胞存活率，具有防治1型糖尿病的作用。STZ誘導胰島Β細胞凋亡可能與NO介導有關。第二部分目的通過將ADRIGF1基因以三種不同途徑肌肉注射、腹腔注射、胰島被膜下注射導入SD大鼠體內，觀察不同組別大鼠糖尿病的發(fā)病情況，觀察ADRIGF1基因對STZ誘發(fā)SD大鼠糖尿病的保護作用，以及比較3種不同注射途徑體內表達的效果，為RIGF1進行基因防治糖尿病創(chuàng)造條件。方法46周齡SD雄性大鼠90只，隨機分為A糖尿病對照組，B空白對照組，C腺病毒空載體對照組，D肌肉注射ADRIGF1組，E腹腔注射ADRIGF1組，F胰腺被膜下注射ADRIGF1組，每組各15只。A組、B組不做任何處理，C組注射含ADEGFP的重組腺病毒液01ML8O107PFU，D、E、F組注射含ADRIGF1的重組腺病毒液01ML10108PFU。1周后A組及D、E、F組大鼠分別禁食12H后給予腹腔注射STZ50MGKG促發(fā)糖尿病，每周測定體質量、血糖，血糖≥167MMOLL并維持1周者確定為發(fā)生糖尿病。成模5周后處死大鼠，取胰腺做病理切片HE染色觀察胰腺炎癥浸潤程度，SABC免疫組化試劑盒檢測大鼠胰腺組織中IGF1局部表達程度；取下腔靜脈血1ML，EIISA試劑盒檢測血清IGFL及胰島素含量。采用SPSSL30統(tǒng)計分析軟件對數據進行分析。結果A、D、E、F組大鼠腹腔注射STZ2天后出現明顯的多飲多尿現象，糖尿病成模率分別為A組100％，D組615％，E組60％，F組667％。D、E、F組糖尿病發(fā)病率明顯低于A組，但D、E、F各組之間無明顯差異；胰腺切片HE染色顯示D、E、F組胰腺炎程度較A組輕，但明顯高于B、C組，且D、E、F各組之間胰島炎情況無明顯差別免疫組化顯示D、E、F組IGF1胰島局部高表達，且D、E、F三組之間無明顯差異，但明顯高于A、B、C組；ELISA法測得D、E、F組血清胰島素水平較A組高，且D、E、F三組之間無明顯差異，與B、C組相比亦差異亦不明顯；血清IGF1水平各組之間無明顯差異。結論腺病毒介導的IGF1基因對STZ誘導的SD大鼠1型糖尿病有一定的預防作用，可以使胰腺局部高表達IGF1，減輕胰腺炎程度，但與IGF1注射途徑無明顯相關性。

簡介：目的以11例強迫癥來訪者為研究對象，探討“情緒認知行為”心理干預方法對強迫癥干預的有效性及干預效果。方法使用“情緒認知行為”心理干預方法對強迫癥進行干預。同時用耶魯布朗強迫量表YBOCS、自編主觀評定問卷為評定工具，將單被試ABABA輪回實驗設計與臨床心理干預相結合，記錄來訪者強迫癥狀的改變量。結果通過觀測單被試強迫行為，以及焦慮情緒、受強迫行為困擾程度和對強迫行為控制程度的主觀感受自我評分在各單元變化的趨勢，發(fā)現單被試的YBOCS總分由實驗前的30分變?yōu)閷嶒灪蟮?分，減分率為77％。對另外10例強迫癥來訪者的心理干預有效率也達100％YBOCS總分的減分率≥20％，其中5例痊愈治療后YBOCS總分＜16，4例強迫癥狀顯著改善YBOCS總分的減分率≥35％，1例有改善YBOCS總分的減分率≥20％。結論經過研究證明了“情緒認知行為”心理干預方法是有效的。這種心理干預方法對強迫癥的干預效果是理想的。

簡介：乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV，可引起由無癥狀病毒攜帶、急慢性肝炎、肝硬化至肝癌的一系列病變。Α干擾素INTERFERONCT，IFNA是目前最常用的治療乙型肝炎的藥物之一，它通過建立細胞內抗病毒狀態(tài)和免疫調節(jié)作用抑制并清除病毒。但臨床發(fā)現約2／3的患者表現為對IFNOT治療無反應，即沒有出現HBEAG消失和血清HBVDNA水平降低，這與HBVDNA聚合酶有關。FOSTER等發(fā)現，表達HBVDNA聚合酶的末端蛋白該“末端蛋白”事實上還包括部分SPACER區(qū)，見本文第2部分可顯著抑制細胞對IFNA反應，并認為是由TP表達阻斷IFNA通路引起，但其抗IFNA作用的功能區(qū)域迄今尚不清楚。為此，本研究擬通過構建基因缺失突變體方式，研究并確定HBVDNA聚合酶末端蛋白抗IFNOT反應的功能區(qū)域。這一研究不僅有助于深入闡明HBV抗IFNOT機制，還可為研制新的抗HBV藥物提供新思路。本研究的第一部分旨在建立肝細胞對IFNOT反應強弱的定量判定標準。為此，將人類616基因一種IFNCT特異性反應基因啟動子區(qū)克隆到氯霉素乙?；D移酶CHLAMPHENICOLACETYLTRANSFERASE，CAT基因上游，構建IFNA反應報告載體P616CAT。結果表明，轉染該載體的HUH7肝細胞在IFNOT誘導后CAT表達量顯著增高，并與IFNOT刺激濃度呈劑量依賴關系。本研究的第二部構建HBVDNA聚合酶末端蛋白包括SPACER區(qū)基因缺失突變體重組真核表達載體，并分別與報告載體P616CAT共轉染HUH7細胞，通過檢測轉染細胞中CAT表達量高低評價各缺失體抗IFNA作用。結果表明，HBVDNA聚合酶末端蛋白本身并無抗IFNCT作用，但末端蛋白SPACER區(qū)部分或全部具有明顯的抗IFNA作用。說明HBVDNA聚合酶SPACER區(qū)與HBV的抗IFNET作用密切相關。

簡介：目的1研究新型陽離子磷酸膽堿聚合物MPC30DEA70能否作為攜帶小干擾RNASIRNA的載體并進一步研究其發(fā)揮的生物學效應。2觀察該載體攜帶針對乙型肝炎病毒HBVX基因的SIRNA在細胞水平能否抑制HBV的復制。方法①DAPI染核及四甲基偶氮唑鹽MTT比色法分析MPC30DEA70對HEPG2215的細胞毒性。②設計熒光素酶表達質粒的小干擾SILUC以無熒光標記的MPC30DEA70負載紅色熒光標記的SILUC轉染HEPG2215細胞24、48H后熒光顯微鏡下拍照并計算在該細胞中的轉染效率。③在此基礎之上檢測48H時轉染細胞中的SILUC對熒光素酶基因表達的抑制效應。④用同法轉染針對HBVX基因的小干擾SIHBVXRTPCR法檢測48H后HBVMRNA水平的變化并分別于24、48、72H后用ELASA法檢測細胞培養(yǎng)上清中的HBSAG實時熒光定量RCR技術對HBVDNA進行定量檢測。結果①在本實驗設定的05、1、3、5UG四個濃度下MPC30DEA70對HEPG2215細胞的毒性較小細胞存活率均在80％以上。②MPC30DEA70負載SILUC在48H的轉染效率可達到5233±20％而脂質體負載的SILUC可達到5633±24％。③48H時轉染HEPG2215細胞中的SILUC能夠有效抑制熒光素酶質粒的表達。③RTPCR法證實48H時以MPC30DEA70載體組SIHBVX與內參ΒACTIN條帶灰度比值114±01與空白對照組251±02比較差異有統(tǒng)計學意義與脂質體組085±01比較差異無統(tǒng)計學意義MPC30DEA70負載SIHBVX能夠降低細胞上清液中HBSAG水平和HBVDNA的水平。72H時檢測值分別為634±01NGML和400±03107COPICSML與空白細胞組的2286±15NGML和1290±02107COPIESML比較差異有統(tǒng)計學意義。結論1MPC30DEA70攜帶的SIRNA能夠進入HEPG2215細胞中且有著較高的轉染效率并發(fā)揮了一定的生物學效應但抑制效果不及脂質體組。2MPC30DEA70攜帶的SIRNA能夠進入HEPG2215細胞中后能夠使HBVMRNA水平下降且與脂質體組相當。3該載體攜帶的針對HBVX基因的SIRNA對HBSAG、HBVDNA有一定的抑制作用但抑制效果不及脂質體組明顯。

簡介：背景人巨細胞病毒在全世界普遍存在，臨床癥狀主要發(fā)生于免疫系統(tǒng)發(fā)育不全或嚴重的免疫力缺乏患者。其包膜糖蛋白BGB在病毒感染及誘導機體免疫反應中起重要作用，其中GBN1型是主要的致病型之一，在我國的HCMV感染者中占有明顯優(yōu)勢。目的制備能敏感且特異地識別HCMVGBN1型病毒株的抗體，為今后臨床檢測HCMVGBN1提供物質基礎，并為HCMV疫苗的制備及HCMV的基礎研究提供了有力保障。實驗方法根據GENBANK公布的序列M60929，利用計算機輔助設計，確定并人工合成GBN1抗原多肽，并用KEYHOLELIMPETHEMOCYANINKLH交聯以增強GBN1抗原多肽的免疫原性。將交聯KLH的GBN1抗原肽免疫新西蘭兔經初次免疫和四次加強免疫后獲取免疫兔血清，親和純化法純化兔血清中抗GBN1抗體。采用直接ELISA法、免疫細胞化學染色法、WESTERNBLOT免疫沉淀法鑒定抗GBN1抗體的效價、反應的特異性和敏感性。實驗結果ELISA法，抗原交叉反應等實驗顯示，抗GBN1抗體能夠特異地識別HCMVTOWNE株GBN1型，制備的抗體效價164000，且與其它型別的HCMVAD169株及GBN3株不發(fā)生反應。免疫細胞化學染色法鑒定結果顯示抗GBN1型抗體的特異性與PCR測定GBN1基因型的結果符合，而且與其他兩型GBN2型和GBN3型無交叉反應。以HCMVTOWNE臨床分離株、HCMVAD169病毒株、HCMVGBN3型床分離株和正常細胞株為抗原，純化的抗GBN1抗體作為一抗進行WESTERNBLOT分析顯示，抗GBN1抗體TOWNE株的制備蛋白反應后在相對分子質量約110KD處出現1條清晰條帶，符合HCMVGB的分子量。說明所制備的抗體可識別含有合成多肽相同片斷的HCMV，即GBN1型HCMV，而不識別其它型別的病毒株，證明抗GBN1抗體具有良好的特異性。結論本研究制備的抗HCMVGAN1抗體能敏感且特異地識別HCMVGBN1型病毒株。該抗體在今后HCMV感染的診斷、治療、病毒的結構功能研究以及抗體分析等方面具有良好的應用前景。

簡介：目的針對2010版慢性乙型肝炎防治指南中，不建議抗病毒治療的非活動性HBSAG攜帶者、輕度CHB患者、慢性HBV攜帶者，進行中醫(yī)干預思路及方法的研究。方法①總結慢性乙型肝炎非抗病毒適應癥患者的中西醫(yī)研究現狀，中醫(yī)“治未病”理論的相關內容。提出在“治未病”理論的指導下對其進行中醫(yī)藥干預治療的必要性。②通過411例慢性乙型肝炎非抗病毒適應癥患者的臨床流行病學調查，初步分析其致病特點、病機規(guī)律，明確該類患者所屬的“未病”范疇，分析其臨床生存現狀。③在“欲病救萌”的思想指導下，收集國醫(yī)大師周仲瑛教授辨治慢性乙型肝炎非抗病毒適應癥病案176例，運用相關統(tǒng)計軟件進行數據分析，總結周教授的臨床經驗和學術思想，初步探索該類患者的中醫(yī)干預思路及方法。結果①流行病學調查中，有71％的患者無明顯不適癥狀，其余患者的主要臨床癥狀（頻率＞10）依次為倦怠乏力、食欲不振、小便發(fā)黃、腹脹、惡心嘔吐、面色晦暗、失眠、口苦、脅不適。②臨床流行病學調查患者的病機證素分虛實兩端。實性病機證素主要為濕、熱、郁；虛性病機證素主要為氣虛。③周教授病案中568的患者無明顯不適癥狀，主要陽性癥狀（頻率＞10依次為尿黃、倦怠乏力、口干、大便溏、脅隱痛、脅痛、口苦、胃脘脹痛、脅脹痛。④周教授病案中，病位證素主要在肝、脾、腎；病性證素分虛實兩端，實性病機證素以濕熱瘀毒郁為主，虛性病機證素以氣虛、陰虛為主。⑤周教授治療該類患者的重要藥物組合主要為炙僵蠶、蟬衣、片姜黃、升麻、生甘草、虎杖。⑥周教授使用頻率超過25的藥物依次為醋柴胡、赤芍、垂盆草、蒲公英、廣郁金、虎杖、茵陳、白術、制香附、炒黃芩、丹參、葉下珠、苦參、太子參、厚樸、茯苓、炙甘草、片姜黃。結論①慢性乙型肝炎非抗病毒治療適應癥患者應當歸屬為“未病”理論中的“欲病”范疇，需要干預治療。②慢性乙型肝炎非抗病毒適應癥患者的基本病機特點為正虛邪實，正虛以脾氣虛、肝腎陰虛為主；邪實以濕、熱、瘀、毒、郁為主，各病機證素往往復合為患。③周教授辨治慢性乙型肝炎非抗病毒適應癥患者的組方特色是升降疏化，補瀉同用。④辨證結合辨病是臨床發(fā)揮中西醫(yī)結合特色的契合點之一。周教授在藥物的選擇方面，在針對相應病機的辨證論治基礎上，往往采用藥理研究具有抗病毒作用的藥物。

簡介：上海交通大學碩士學位論文EB病毒對臍帶血樹突狀細胞分化和功能的影響姓名王璽申請學位級別碩士專業(yè)兒科學指導教師陳同辛20070514上海交通大學醫(yī)學院碩士研究生學位論文VI胞和DC。感染EBV后，臍帶血DC吞噬葡聚糖的能力降低；細胞表面分化和成熟標記與正常對照相比表現為CD14分子的下調不明顯，而MHCⅡ類分子和協(xié)同刺激分子上調不明顯，MHCⅠ類分子的表達降低；細胞因子分泌的改變表現為LPS刺激后細胞分泌的IL6、IL10和TNFΑ不增高，而TGFΒ1在EBV感染后分泌增高，同時EBV還抑制了IL12P35和IFNΓ的MRNA表達。結論結論單核細胞和未成熟DC均可被EBV感染，并且由于成人外周血單核細胞和DC內LMP1蛋白MRNA的拷貝數明顯高于臍帶血單核細胞和DC，推測EBV在成人外周血單核細胞和未成熟DC內更易復制。EBV抑制了DC的吞噬功能，阻礙了DC的分化和成熟，使DC攝取處理抗原和提呈抗原的能力受損。MHCI類分子的降低導致在控制EBV感染中發(fā)揮關鍵性作用的MHCI類分子限制性的CD8＋細胞毒性T細胞功能受損。此外，EBV還使DC分泌抑制性細胞因子增加，抑制了宿主免疫，并且使免疫應答反應向T輔助細胞2方向偏移，削弱了細胞免疫功能，以上因素均可導致EBV逃逸宿主免疫。關鍵詞新生兒，臍帶血，EB病毒，樹突狀細胞，分化，功能

簡介：目的認知能力是指接收、加工、儲存和提取信息的能力，是人們成功的完成活動最重要的心理條件。優(yōu)秀的認知功能也是殲擊機飛行員所必備的心理品質。殲擊機飛行員在人員組成、學歷、生活經歷、智力、工作性質等方面與普通人群有著顯著差別，所以，針對普通大眾而研制的基本認知能力測驗應用于殲擊機飛行員這一特群體時其信效度如何以及如何原評價標準區(qū)分度的如何等本研究旨在通過殲擊機飛行員基本認知能力測驗進行信效度分析，為測驗提供重要的理論依據指導，并為之制定常模及較為合理的評價標準。方法采用中科院心理所制定的基本認知能力測驗系統(tǒng)（20版），在全軍南北共十五個建制飛行單位來院體檢人員中，采用分層（計算機化）隨機的方法抽取殲擊機飛行員378名進行測試。結果①各分量表重測信度高，相關系數分別是數字拷貝R098（P﹤001）漢字比較R080（P﹤001）心算R081（P﹤005）漢字旋轉R063（P﹤005）數字工作R089（P﹤001）雙字詞再認R059（P﹤001）無意義圖形再認R052（P﹤005）。②因素分析發(fā)現基本認知能力測驗存在六個緯度，分別是數字拷貝、雙字詞再認、數字加工、數字工作、漢字比較、心算。③第1年齡組在知覺速度高于第2年齡組（P﹤005）；心理旋轉和字詞、圖形記憶能力低于第2年齡組（P﹤005）。心算效率和工作記憶在兩個年齡組沒有明顯差異。④樣本在標準九分轉化表中分布情況接近理論分布。結論1、殲擊機飛行員“基本認知能力測驗”信效度較好，可以用于殲擊機飛行員的認知功能的研究測試。2、年輕殲擊機飛行員的基本認知綜合能力隨著年齡的增長而增長，在29歲左右達到峰值，然后緩慢下降，在36歲左右開始出現明顯下降趨勢。3、殲擊機飛行員基本認知五個方面的能力，變化并不一致。知覺速度能力出現衰退較早，心理旋轉和字詞、圖形記憶能力則會隨年齡的增長有一定的增長，而心算效率和工作記憶兩個方面的能力則保持相對穩(wěn)定。4、樣本測試結果參照本研究制定的常模得分，殲擊機飛行員在標準九分轉化表中得分分布情況較為合理，等級定位較為明確，有利于評價，甄別優(yōu)劣。