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簡介：研究背景本研究為系列研究的組成部分，該系列研究的早期研究結果也發(fā)現(xiàn)RSV感染人氣道上皮細胞與上皮下人原代支氣管成纖維細胞復合培養(yǎng)時可上調(diào)HPBFS白三烯C4合成酶表達并促進CYSLTS、TGFΒ1和ET1合成，白三烯調(diào)節(jié)劑孟魯司特對此過程有明顯抑制作用。綜上所述，推測RSV感染人氣道上皮細胞可能通過上調(diào)CYSLTS的表達與分泌從而啟動氣道重塑的過程。但目前缺乏RSV感染人氣道上皮細胞對上皮下間充質(zhì)細胞增生轉化和ECM分泌水平影響的研究。另外，要系統(tǒng)研究RSV感染相關喘息的分子生物學機制，必須成功建立RSV感染人氣道上皮細胞的體外模型，但目前尚無公認的RSV感染人氣道上皮細胞體外模型。目的1通過系列觀察RSV不同感染復數(shù)和不同感染時間感染16HBE的細胞病變改變，探討RSV感染16HBE最佳條件以成功建立RSV感染16HBE的體外模型，為進一步系統(tǒng)探討RSV感染分子生物學機制提供有效的體外研究細胞模型；2通過RSV感染人氣道上皮細胞與上皮下間充質(zhì)細胞復合培養(yǎng)模型，觀察RSV感染16HBE對HPBFS向肌纖維母細胞轉化及其ECM分泌水平的影響，了解RSV感染氣道上皮細胞能否啟動氣道重塑過程，引起氣道慢性組織病理學改變，以期探討嬰幼兒RSVLRTI引起慢性持續(xù)性哮喘的相關機制；3同時觀察常用的哮喘長期控制藥物吸入糖皮質(zhì)激素及白三烯調(diào)節(jié)劑對RSV感染氣道上皮細胞促進上皮下間充質(zhì)細胞增生轉化和ECM分泌過程可能存在的抑制作用，為RSV感染誘發(fā)的喘息和兒童哮喘有效早期預防藥物的選擇提供理論依據(jù)。方法1細胞培養(yǎng)和RSV傳代、凍存、定量培養(yǎng)實驗所需的人喉癌上皮細胞株、16HBE和HPBFS。以RSV易感的HEP2進行病毒的繁殖、傳代、凍存，空斑技術測定病毒感染單位量。2RSV感染16HBE體外模型的建立16HBE細胞以104ML分種于96孔培養(yǎng)板，50UL孔待細胞70％匯合后，動態(tài)觀察接種24H、48H、72H、96H、120H后16HBE細胞形態(tài)學改變，細胞增殖活性實驗檢測細胞增殖活性，并以RTPCR法檢測16HBE細胞中RSV病毒核酸和直接免疫熒光技術察知病毒相應抗原在感染細胞內(nèi)的定位。3RSV感染16HBE對HPBFS向肌纖維母細胞轉化的影響HPBFS以1X105WELL接種于放入一小玻片的6孔板，同時16HBE細胞以大致相同的密度接種于培養(yǎng)小室，以MOI為01的RSV接種于16HBE，吸附2小時將培養(yǎng)小室放入培養(yǎng)有HPBFS的6孔板中。實驗分16HBERSVHPBFS組和16HBEHPBFS組，復合培養(yǎng)24H、48H、72H、96H和120H，于各時間點收集6孔板中的HPBFS和上清液，應用間接免疫熒光法和蛋白免疫印跡檢測Α平滑肌肌動蛋白的表達水平，應用競爭性酶連免疫吸附試驗檢測上清液Ⅰ型膠原和纖維結合蛋白的分泌水平。4BUD對RSV感染16HBE促進HPBFS向肌纖維母細胞轉化過程的影響HPBFS以1X105WELL接種于放入一小玻片的6孔板，同時16HBE細胞以大致相同的密度接種于培養(yǎng)小室，以MOI為01的RSV接種于16HBE，吸附2小時將培養(yǎng)小室放入培養(yǎng)有HPBFS的6孔板中。實驗分組16HBEHPBFS組、16HBERSVHPBFS組、16HBERSVHPBFSBUD組、16HBERSVHPBFSBUD組和16HBERSVHPBFSBUD組，復合培養(yǎng)72H后收集6孔板中的上清液和細胞，檢測細胞ΑSMA的表達水平和上清液中COLⅠ的分泌水平。5MONT對RSV感染16HBE促進HPBFS向肌纖維母細胞轉化過程的影響HPBFS以1X105WELL接種于放入一小玻片的6孔板，同時16HBE細胞以大致相同的密度接種于培養(yǎng)小室，以MOI為01的RSV接種于16HBE，吸附2小時將培養(yǎng)小室放入培養(yǎng)有HPBFS的6孔板中。實驗分組16HBEHPBFS組、16HBERSVHPBFS組、16HBERSVHPBFSMONT組、16HBE–RSVHPBFSMONT組和16HBERSVHPBFSMONT組，復合培養(yǎng)72H后收集6孔板中的上清液和細胞，檢測細胞ΑSMA的表達水平和上清液中COLⅠ的分泌水平。結果1RSV感染16HBE體外模型的建立MOI為01組接種72H后16HBE的GI為085，即死亡細胞不多，與未感染對照組相比85％細胞仍為活細胞，光學顯微鏡下觀察見細胞胞體增大，透亮度降低，小部分細胞呈壞死聚集狀，直接免疫熒光技術能檢測到病毒抗原在胞漿內(nèi)表達，PCR技術能從16HBE提取的總RNA中擴增出RSV病毒核酸的基因片段，證實RSV成功感染16HBE，且MOI為01和感染時間為72H是RSV感染16HBE最佳條件。2RSV感染16HBE對HPBFS向肌纖維母細胞轉化的影響在24H和48H時，16HBERSVHPBFS組和16HBEHPBFS組未見ΑSMA的表達，從72H開始兩組均有不同程度的ΑSMA表達，96H表達水平最高。16HBERSVHPBFS組在72H、96H和120H時ΑSMA的表達水平均顯著高于16HBEHPBFS組。在24H、48H、72H、96H和120H時，16HBERSVHPBFS組COLⅠ的分泌水平均明顯高于16HBEHPBFS組而且隨復合培養(yǎng)時間的增加，COLⅠ分泌水平也逐漸增加，120H的分泌水平最高，顯著高于24H、48H、72H和96H。在24H、48H、72H、96H和120H時，16HBERSVHPBFS組FN的分泌水平與16HBEHPBFS組比較均無統(tǒng)計學差異，兩組各時間段比較也無統(tǒng)計學意義。3BUD對RSV感染16HBE促進HPBFS向肌纖維母細胞轉化的影響16HBERSVHPBFS組ΑSMA的表達水平明顯高于16HBEHPBFS組。16HBERSVHPBFSBUD108組、16HBERSVHPBFSBUD106組和16HBERSVHPBFSBUD105組ΑSMA的表達水平與16HBERSVHPBFS組比較均無統(tǒng)計學意義差異。16HBERSVHPBFS組COLⅠ的分泌水平明顯高于16HBEHPBFS組。16HBERSVHPBFSBUD108組、16HBERSVHPBFSBUD106組和16HBERSVHPBFSBUD105組COLⅠ的分泌水平與16HBERSVHPBFS組之間比較均無統(tǒng)計學意義差異（T分別為2365、3594和4061，P均005）。4MONT對RSV感染16HBE促進HPBFS向肌纖維母細胞轉化的影響16HBERSVHPBFS組ΑSMA的表達水平明顯高于16HBEHPBFS組（T為36957，P結論1RSV可成功感染16HBE，但受RSV感染的16HBE僅出現(xiàn)細胞胞體增大，透亮度降低，壞死細胞增多呈聚集狀，不形成典型融合病變，MOI為01和感染時間為72H是RSV感染16HBE最佳條件；2RSV感染人氣道上皮細胞與上皮下成纖維細胞復合培養(yǎng)時可以促進成纖維細胞向肌纖維母細胞轉化并促進細胞外基質(zhì)COLⅠ的分泌，從而啟動氣道重塑的過程。3白三烯調(diào)節(jié)劑孟魯司特能有效抑制RSV感染人氣道上皮細胞促進成纖維細胞向肌纖維母細胞轉化并增加細胞外基質(zhì)COLⅠ分泌的過程，提示CYSLTS在RSV相關喘息及其啟動氣道重塑中起重要作用。4吸入糖皮質(zhì)激素BUD不能有效抑制RSV感染人氣道上皮細胞促進成纖維細胞向肌纖維母細胞轉化并增加細胞外基質(zhì)COLⅠ分泌的過程，這可能是糖皮質(zhì)激素對嬰幼兒RSV感染相關喘息療效不明確的原因。5、RSV感染誘導氣道上皮細胞分泌CYSLTS，從而啟動氣道重塑過程可能是導致易感個體RSVLRTI后反復喘息與持續(xù)性哮喘發(fā)生的分子生物學途徑之一，對RSV相關喘息及其啟動氣道重塑分子生物學機制的闡明，可望為兒童哮喘早期有效預防藥物的選擇提供理論依據(jù)，可望能在嬰幼兒RSV感染急性期即給予有效的防治藥物，以阻斷RAD及日后持續(xù)性哮喘的發(fā)生。

簡介：類號分級密國際進類號十分（UDC）第四軍醫(yī)大學學位論文健康青年腦力疲勞生理指標和認知功能的實驗研究題題（名和副名）馬進（作者姓名）導教師指姓名張作明教授導教師單指位航空航天醫(yī)學系臨床醫(yī)學教研室請學級別申位博士專業(yè)稱名航空航天與航海醫(yī)學論文提交日期200804辯答日期200805論時間文起止2006年6月至2008年3月學單位授予位第四軍醫(yī)大學獨獨創(chuàng)創(chuàng)性性聲聲明明健康青年腦力疲勞生理指標和認知功能的實驗研究研究生馬進馬進學科專業(yè)航空航天與航海醫(yī)學航空航天與航海醫(yī)學所在單位第四軍醫(yī)大學航空航天醫(yī)學系第四軍醫(yī)大學航空航天醫(yī)學系導師張作明教授張作明教授輔導教師胡文東研究員胡文東研究員資助基金項目關鍵詞腦力疲勞；瞳孔面積；心率變異性；認知能力；工效學；自主神經(jīng)中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學2008年05月

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簡介：研究目的該課題采用回顧性分析方法對慢性重型病毒性肝炎合并糖尿病患者的肝功能與生化各項指標、各種并發(fā)癥以及轉歸進行臨床分析了解慢性重型病毒性肝炎合并糖尿病臨床轉歸上的特點有助于指導臨床上慢性重型病毒性肝炎合并糖尿病患者病情的觀察及治療結論1慢性重型病毒性肝炎合并糖尿病導致病情不易恢復影響膽紅素代謝功能合并糖尿病組患者總膽紅素增至峰值所需的時間延長恢復緩慢2慢性重型病毒性肝炎合并糖尿病患者的糖代謝異常主要表現(xiàn)在空腹血糖較無合并糖尿病患者的高同時亦可出現(xiàn)空腹低血糖現(xiàn)象故對病毒性肝炎合并糖尿病患者血糖的控制既要積極防止高血糖又要注意低血糖的發(fā)生3慢性重型病毒性肝炎合并糖尿病時更容易發(fā)生感染、肝腎綜合癥、肝性腦病致病情加重甚至死亡

簡介：本試驗采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗原理，對戊型肝炎病毒抗原酶聯(lián)免疫試劑的研制及評價進行研究。在微孔板上預包被以大腸桿菌表達HEVF2片段的重組抗原免疫家兔制得的HEV多克隆抗體，捕獲樣品中的戊型肝炎病毒抗原，洗板后加入HRP標記的大腸桿菌表達HEVF2片段的重組抗原免疫制得的HEVF24＃單克隆抗體二次溫育，當樣品中存在戊型肝炎病毒抗原時，將形成“包被抗體抗原酶標抗體”復合物，再次洗板后加入TMB顯色劑進行溫育，復合物上連接的HRP使顯色劑生成藍色產(chǎn)物，終止后變?yōu)辄S色。當樣品中無戊型肝炎病毒抗原時，不顯色。通過酶標儀檢測吸光度（A值）從而判斷樣品中HEV病毒抗原存在與否。本試劑評價試驗共收集2216例血清樣本。其中（以臨床背景計）疑似戊型肝炎患者樣本722例未感染戊肝病毒的患者樣本116例其它肝病等易混病例及普通人群樣本1494例。考核試劑檢出126例陽性結果，258例陰性結果HEVRNA方法檢出162例陽性結果，222例陰性結果。用HEVRNA方法檢測為陽性的162例樣本中，考核試劑檢測陽性的樣本為103例，考核試劑與HEVRNA方法陽性符合率為64％在HEVRNA方法檢測為陰性的222例樣本中，考核試劑檢測陰性的樣本為199例，陰性符合率為90％考核試劑與HEVRNA檢測方法比較，敏感度略低于PCR方法，但抗原檢測的檢出譜高于PCR方法，比PCR更具有一定的實用價值，且操作更為簡便。本試劑具有以下特點1）本試劑可檢測人血清或血漿中的HEV抗原，含有EDTA、檸檬酸鈉或肝素等抗凝劑的樣品可用于本試劑檢測，不能檢測含懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血的樣品2）本試劑具有很高的診斷靈敏度，特異性強，重復性以及穩(wěn)定性良好3）本試劑操作簡單快速，對實驗設施、儀器設備、環(huán)境和操作人員要求低，整個檢測過程僅需105分鐘，便于醫(yī)療衛(wèi)生機構開展HEV檢驗工作4）本試劑與HEVRNA檢測方法比較，敏感度略低于PCR方法，但抗原檢測的檢出譜高于PCR方法，比PCR更具有一定的實用價值，該試劑的研發(fā)為戊型肝炎的臨床診斷增添了一種新的方法，適合作為臨床HEV感染早期診斷的輔助手段。

簡介：點擊查看更多輪狀病毒NSP4基因變異與致病性改變的關系及其免疫學特性研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的調(diào)查研究寧夏地區(qū)綿羊中的BDV的自然感染狀況。對陽性檢測樣本的核苷酸序列進行連接測序，比較分析BDVP24基因序列，建立病毒株的種系發(fā)生樹，闡明其在寧夏地區(qū)綿羊中的自然感染情況及其可能的種系來源；應用轉染的OL作進一步的病毒核蛋白的細胞內(nèi)定位研究，初步探討病毒的感染和發(fā)病機制。方法應用巢式逆轉錄熒光定量PCRFQNRTPCR技術檢測中國寧夏地區(qū)綿羊腦組織和PBMC中的BDVP24和P40基因片段；對檢測BDVP24和P40基因片段均為陽性標本的P24基因片段進行連接、克隆、測序，并應用EMBL、DNASP40和MEGA40軟件分析核苷酸和氨基酸序列同源性相似度，構建NEIGHBJOINING基因系統(tǒng)發(fā)生樹并分析病毒感染的可能來源；對轉染的OL應用激光共聚焦顯微鏡技術和WESTERNBLOT的方法觀察病毒核蛋白在細胞內(nèi)的表達定位。結果在寧夏地區(qū)163只綿羊腦組織和710只綿羊的PBMC中檢測到BDVP24和P40陽性基因片段，檢出率分別為368％6163和127％9710；對15例陽性檢出標本進行連接、克隆、測序，連同14例前期檢測序列基因聚合分析顯示核酸之間的同源相似度為965％～100％，氨基酸的同源相似度為953％～100％。與德國馬源性標準株HE80同源相似度較高。構建基因的系統(tǒng)發(fā)生樹發(fā)現(xiàn)寧夏的VE患者、抑郁癥患者、綿羊和同德國馬、綿羊、奧地利馬都各自形成了獨立的支系，其余陽性檢出序列形成混合支系，其中寧夏的VE患者、牛、綿羊同德國的馬、日本的綿羊形成了‘德國中國寧夏日本’的混合支系；在轉染BDVP40基因片段的熒光表達質(zhì)粒的OL內(nèi)激光共聚焦顯微鏡提示核蛋白存在于細胞漿和細胞膜中；WESTERNBLOT的結果顯示在細胞膜蛋白中存在核蛋白，而在細胞漿中未檢測到該蛋白。結論中國寧夏地區(qū)綿羊中可能存在BDV的自然感染；寧夏地區(qū)人和動物BDV的感染存在區(qū)域源性BDV獨立株和國外傳入基因保守株的多源性；在轉染的OL內(nèi)穩(wěn)定表達了BDV核蛋白，并將其定位在細胞的結構蛋白中，尤其在細胞膜中含量更為豐富，推斷其可能在細胞的信號轉導或介導病毒感染入胞過程中發(fā)揮關鍵作用。

簡介：目的確定清肺口服液治療小兒呼吸道合胞病毒肺炎的有效性和安全性。觀察清肺口服液含藥血清對RSV感染后人胚肺成纖維細胞轉化生長因子Β1和血小板衍生生長因子BBMRNA基因表達的影響。方法選取RSV肺炎痰熱閉肺證患兒62例，隨機分組，試驗組27例，治療用清肺口服液口服加生理鹽水靜滴，對照組35例，治療用利巴韋林靜滴加口服液安慰劑口服，以發(fā)熱、咳嗽、氣喘、痰壅及肺部聽診及X線檢查為主要療效指標，以臨床積分及癥狀消失率等定量依據(jù)觀察療效。采用實時熒光定量PCR法觀察清肺口服液含藥血清對RSV攻擊后人胚肺成纖維細胞TGFΒ1和PDGFBBMRNA表達變化的影響。結果兩組咳嗽、痰壅、肺部聽診及X線檢查改善情況比較，試驗組療效優(yōu)于對照組，氣喘和發(fā)熱改善方面兩組療效相近。治療前后兩組主癥積分、次癥積分及總積分減少情況比較，試驗組療效優(yōu)于對照組。試驗組痊愈率及顯效率等綜合療效顯著優(yōu)于對照組。實驗研究表明，RSV感染后HELF細胞TGFΒ1MRNA表達降低，PDGFBBMRNA表達升高，清肺口服液含藥血清作用后，RSV感染后HELF細胞TGFΒ1MRNA表達水平升高，PDGFBBMRNA表達下降。結論清肺口服液是治療小兒RSV肺炎痰熱閉肺證安全有效制劑。清肺口服液可調(diào)節(jié)TGFΒ1和PDGFBBMRNA基因表達，通過免疫學機制起治療作用。

簡介：目的本研究是根據(jù)我省歷年來上報的乙型腦炎資料分析我省乙型腦炎的流行趨勢，并在不同生態(tài)環(huán)境中捕捉蚊蟲標本，找出我省不同生態(tài)環(huán)境中的優(yōu)勢蚊種，同時用細胞培養(yǎng)的方法從蚊體內(nèi)分離病毒，并用常規(guī)PCR和熒光PCR的方法進行初步鑒定，篩選乙型腦炎病毒，為以后對病毒進行核苷酸序列分析、鑒定病毒種類、研究我省存在的乙腦病毒與國內(nèi)、外其他地域同種病毒的差異，繪制系統(tǒng)發(fā)生樹，進而研究病毒的進化規(guī)律和分析目前使用的疫苗有無保護作用打下基礎。方法1資料收集根據(jù)歷年來我省上報的乙型腦炎資料進行統(tǒng)計，參考我省已發(fā)表的有關此課題的文獻，進行分析乙腦流行趨勢及其原因。2標本的收集運輸在不同生態(tài)環(huán)境中將捕到蚊子，快速凍死后剔除雄蚊，將蚊子分類，50～100只為一組，裝入凍存管中，用醫(yī)用膠布封口，并用記號筆編號，凍存管放入布袋中后及時放入液氮中，送至實驗室。3根據(jù)在我省不同生態(tài)環(huán)境中采集蚊蟲標本結果，分析我省不同生態(tài)環(huán)境中蚊種的構成，找出優(yōu)勢蚊種。4利用BHK和VERO細胞培養(yǎng)的方法對蚊子攜帶的病毒進行分離。5用TRIZOLLSREAGENT提取分離到病毒的RNA，再用常規(guī)PCR和熒光PCR方法進行初步鑒定。結果1河南省乙型腦炎發(fā)病情況同我國總的情況基本一致。自20世紀70年代后期大規(guī)模使用乙腦疫苗后，除1990與1991年有個小發(fā)病高峰外，乙腦發(fā)病率在顯著下降，2004年發(fā)病率達到了03910萬；發(fā)病具有明顯的季節(jié)性，85％以上病例發(fā)生集中在7、8、9三個月，這與我省蚊蟲出現(xiàn)隨季節(jié)性變化而變化的特點相一致；病例主要分布于氣溫相對較高、雨量相對偏多的豫南、豫東南的信陽、駐馬店、南陽市、周口市以及商丘的部分地區(qū)，平頂山、洛陽、偶有集中發(fā)病，黃河以北地區(qū)發(fā)病相對減少。年齡分布主要集中于10歲以下兒童，占80％以上，5歲以下病例約占50％，男女性別比為14∶1。2本次實驗在我省不同生態(tài)環(huán)境中共捕獲蚊蟲25787只，其中庫蚊18999只，按蚊2715只，伊蚊85只，阿蚊3878只。庫蚊占全部蚊蟲的737％，按蚊占105％，伊蚊03％，阿蚊占15％，可見庫蚊為我省優(yōu)勢蚊種。山區(qū)、平原和濕地均以庫蚊為主，山區(qū)及濕地未能捉到伊蚊；而丘陵地區(qū)按蚊和阿蚊為優(yōu)勢蚊種，庫蚊和伊蚊較少；在黃河濕地阿蚊也占一定比例。3隨機將每個生態(tài)環(huán)境中所捕蚊子取出10管，組成一個組，研磨接種細胞，進行病毒分離。共分離到8株可疑病毒，均能引起B(yǎng)HK細胞和VERO細胞穩(wěn)定病變。BHK細胞病變以圓縮和脫落為主，而VERO細胞病變以聚集、拉網(wǎng)、圓縮為主。出現(xiàn)病變時一般在48～72小時之間，均具有濾過性022ΜM濾過膜，其中4株病毒帶回北京進行鑒定，其余4株病毒經(jīng)常規(guī)PCR及熒光PCR鑒定發(fā)現(xiàn)有一株為乙型腦炎病毒。結論河南省于1953年從病人的腦組織中分離到了乙腦病毒，1991年在河南省新安縣采集了淡色庫蚊300只、阿蚊450和三帶喙庫蚊30只，利用細胞和乳鼠對全部標本進行了病毒分離，結果從淡色庫蚊中分離出1株病毒，經(jīng)間接免疫熒光試驗、中和試驗等鑒定為乙型腦炎病毒，是河南省首次證明庫蚊是乙腦的傳播媒介，但未能對分離到的病毒進行核酸測序及鑒定。本次調(diào)查實驗再次證實庫蚊是河南省的優(yōu)勢蚊種，并且是乙型腦炎的主要傳播媒介，分離到的病毒經(jīng)常規(guī)PCR及熒光PCR等鑒定初步認為是乙型腦炎病毒，為動物實驗、病毒核苷酸測序、判斷乙型腦炎病毒的分型以及分析目前所用的乙腦減毒活疫苗對本次實驗所分離到的病毒是否有保護作用打下基礎。

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簡介：網(wǎng)絡成癮特別是青少年網(wǎng)絡成癮成為各國較為普遍的心理健康難題。針對網(wǎng)絡成癮的研究發(fā)現(xiàn)了網(wǎng)癮者認知控制功能的一些異常并且與神經(jīng)影像學中大腦前額葉區(qū)域的變化具有關聯(lián)。然而大腦以神經(jīng)回路為基礎的運作模式?jīng)Q定了獨立區(qū)域的變化并不足以解釋外在行為上的異常。因此對于網(wǎng)絡成癮者大腦前額葉最重要的前額葉紋狀體回路的結構與功能異常研究將有助于理解網(wǎng)絡成癮的神經(jīng)機制。在本文中我們首先使用心理學GONOGO以及STROOP任務對網(wǎng)癮青少年進行行為學測量結果發(fā)現(xiàn)網(wǎng)癮組在NOGO的正確率以及GO的反應時間出現(xiàn)異常并且網(wǎng)癮組具有更長的STROOP效應時間。影像學我們采用基于體素的形態(tài)學測量手段對青少年網(wǎng)癮者前額葉皮層以及皮層下紋狀體區(qū)域的灰質(zhì)體積進行對比分析。結果發(fā)現(xiàn)青少年網(wǎng)癮者前額葉中的雙側前扣帶、眶額葉、背外側前額葉以及右側前輔助運動區(qū)的灰質(zhì)體積顯著減少紋狀體區(qū)域中的右尾狀核、伏隔核以及左殼核灰質(zhì)體積顯著增加。我們將這些灰質(zhì)結構異常的腦區(qū)當做感興趣去進行隨后的靜息態(tài)功能連接度分析結果以前額葉為種子點的分析發(fā)現(xiàn)前額葉到皮層下丘腦、蒼白球、紋狀體區(qū)域的功能連接度異常并且這種異常與他們在行為學任務中的表現(xiàn)分數(shù)直接相關。以紋狀體為種子點的功能連接分析發(fā)現(xiàn)紋狀體到皮層上的眶額葉、額上回等區(qū)域功能連接度異常但是未發(fā)現(xiàn)與認知行為任務表現(xiàn)相關。本文的研究的結果為網(wǎng)絡成癮者的異常認知控制行為模式找到了神經(jīng)生理學機制并佐證了網(wǎng)絡成癮可能與藥物成癮神經(jīng)影像學的一些相似性。

簡介：中山大學碩士學位論文急性期腦卒中認知障礙患者前瞻性記憶的特點研究姓名潘勝桂申請學位級別碩士專業(yè)康復醫(yī)學與理療學指導教師竇祖林20100601中山大學碩士畢業(yè)論文急性期腦卒中認知障礙患者前瞻性記憶的特點研究之一。近年來較多研究表明腦卒中后存在明顯的PM障礙，并認為PM障礙是腦卒中后認知障礙中最顯著和持續(xù)存在的表現(xiàn)。但以往研究多集中于腦卒中慢性期恢復期或后遺癥期，并不能完全揭示急性期腦卒中后認知障礙中PM的表現(xiàn)，也未進一步探討PM評估是否可作為急性期腦卒中認知障礙的評估指標。目的1篩查急性期腦卒中認知障礙患者有無PM障礙，進一步探討PM障礙的表現(xiàn)和可能原因；2探討PM障礙是否可以作為判斷急性期腦卒中患者有無認知障礙的評估指標。研究假設與年齡、性別、文化匹配的正常人的PM比較，急性期腦卒中認知障礙患者PM存在明顯減退，具體表現(xiàn)為1急性期腦卒中認知障礙中PM減退表現(xiàn)為TBPM障礙，可能由激活意圖階段受損導致；2TBPM障礙獨立于其他認知功能受損而存在。研究對象和方法1研究對象根據(jù)本研究設定的入選標準，自2009年6月至2010年2月，在中山大學附屬第三醫(yī)院、中山大學附屬第一醫(yī)院篩選腦卒中急性期患者60例做為實驗組，他們均符合入組條件，如符合2007年全國腦血管病防治指南的診斷標準，CT或M甜診斷為首次腦梗塞或腦出血，病程1月內(nèi)，神經(jīng)行為認知狀況測試NEUROBEHAVIORALCOGNITIVESTATUSEXAMINATION，NCSE不合格。在中山大學附屬第三醫(yī)院職工和患者家屬中篩選NCSE測試合格，年齡、性別、文化與患者匹配的60例正常人做為對照組。他們既往均無神經(jīng)或精神病史。兩組被測試者均簽署知情同意書。Ⅱ

簡介：目的調(diào)查山東漢族人群中系統(tǒng)性紅斑狼瘡SLE、強直性脊柱炎AS及類風濕關節(jié)炎RA患者乙型肝炎病毒HBV的感染情況，同時結合其相關臨床資料進行數(shù)據(jù)分析，討論其可能的影響因素，探討HBV感染對疾病活動度的影響及其臨床意義。研究對象及方法收集山東省立醫(yī)院在2005年1月1日至2012年12月31日期間住院確診的全部SLE、AS、RA患者為病例組（SLE組、AS組、RA組），全面收集其HBV血清學標記物檢測結果并同時記錄其臨床資料，包括癥狀、體征和相關實驗室檢查數(shù)據(jù)。健康對照HEALTHYCONTROL，HC組來自2010年1月1日至2011年7月31日在山東省立醫(yī)院健康查體中心進行健康體檢的合適人群，并收集他們的HBV血清學檢查結果進行統(tǒng)計分析。連續(xù)變量資料用算術平均數(shù)±標準差來表示，采用獨立樣本T檢驗分析，分類變量資料用率表示，用X2檢驗進行分析，以P＜005為有統(tǒng)計學意義，所有數(shù)據(jù)均采用SPSS130軟件進行統(tǒng)計分析。結果1健康體檢人群（HC組）共有11558例，其中男性6734例，女性4824例。統(tǒng)計分析表明，健康對照組的HBV血清學指標存在性別差異，HBSAG、HBEAG陽性率男性顯著高于女性（P0004VSP0001），HBSAB及HBEAB陽性率女性均高于男性（P0008VSP0015），差異具有統(tǒng)計學意義P＜005HBCAB陽性率無性別差異（P＞005）。2SLE組共有960例，其中男性86例，女性874例，統(tǒng)計分析表明，SLE組HBSAG、HBEAB、HBCAB總陽性率及女性中陽性率顯著低于HC組，HBSAB總陽性率及女性中陽性率均高于HC組，差異具有統(tǒng)計學意義P＜005。HBEAG中，無論男性、女性，差異無統(tǒng)計學意義P＞005。在男性患者中，SLE與HC組比較差異無統(tǒng)計學意義P＞005。該組HBSAG、HBSAB、HBEAG、HBEAB、HBCAB陽性率均不存在性別差異（P＞005）。HBSAG陽性、陰性組對比病情活動度相關因素，無統(tǒng)計學差異（P＞005）。3AS組共有393例病人，其中男性292例，女性101例，該組HBSAG、HBSAB、HBEAG、HBEAB、HBCAB陽性率均無性別差異（P＞005）。與HC組相比較AS組HBSAG、HBSAB的總陽性率明顯高于HC組，差異具有統(tǒng)計學意義P＜005其中男性HBSAG、HBSAB陽性率具有統(tǒng)計學差異（P＜005），而女性的HBSAG陽性率雖高于HC組，但差異無統(tǒng)計學意義P＞005，余HBEAG、HBEAB、HBCAB陽性率差異均無統(tǒng)計學意義（P＞005）。統(tǒng)計分析表明AS組HLAB27陽性中HBSAG陽性率高于HLAB27陰性者，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞005）。HBSAG陽性、陰性組對比臨床表現(xiàn)及相關檢查結果，無統(tǒng)計學差異（P＞005）。4RA組共有667例病人，男性146例，女性521例。RA組HBSAG、HBEAG、HBEAB陽性率與HC組相比較均無統(tǒng)計學差異P＞005HBSAB、HBCAB總陽性率高于HC組，差異具有統(tǒng)計學意義P＜005，分組比較，在男性及女性中無統(tǒng)計學差異（P＞005）。該組HBSAG、HBSAB、HBEAG、HBEAB、HBCAB陽性率均無性別差異（P＞005）。HBSAG陽性、陰性組對比臨床表現(xiàn)及相關實驗室檢查結果，HBSAG陽性組ESR、CRP顯著高于HBSAG陰性組，而PLT則相反，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜005）。結論1SLE患者HBSAG陽性率明顯低于健康人群，可能和IL10及IFNΑ水平升高有關。升高的IFNΑ可能在清除HBV起了一定的有利作用。HBV感染與SLE的病情活動度無相關性。2AS患者HBSAG陽性率高于健康對照組，AS患者HBSAG總陽性率明顯高于RA、SLE患者，AS患者HBV的高感染率可能與其攜帶HLAB27基因有關。HBV感染與AS的病情活動度無關。3RA患者的HBSAG陽性率與健康人群無明顯差異。HBV感染對RA的病情活動有影響，原因可能是①HBV參與了RA的發(fā)病機制，導致RA活動度增高，②與對RA患者采用的治療強度不足有關。

簡介：【背景】乙肝病毒（HEPATITISBVIRUSHBV）相關性疾病仍然是當今威脅人類健康的主要疾病之一。全球大約有乙肝病毒攜帶者35－4億人。我國是乙肝的高發(fā)區(qū)，乙肝病毒攜帶者有12億之多，約占我國人口的9％。5年期間，約10－20％慢性肝炎患者可發(fā)展成肝硬化。6％－15％肝硬化和慢性肝炎患者可發(fā)展成肝癌。發(fā)生肝癌后的5年存活率不到5％。而目前的重組干擾素及核苷類似物等抗病毒治療手段由于持久效應低下、副作用、耐藥等導致療效不夠滿意，乙肝病毒復雜的復制調(diào)控過程阻礙著研究人員去尋找有效的治療途徑。因此，在探討乙肝病毒復制的分子機制基礎上尋找有效的治療靶點是目前研究的熱點。現(xiàn)有研究顯示雖然影響HBV復制的因素很多，如病毒自身編碼蛋白、細胞周期、免疫調(diào)節(jié)因子等，但是HBV基因組的轉錄是病毒復制過程中最關鍵的步驟，目前對HBV基因組的轉錄調(diào)控尚缺乏整體認識。已有研究表明一些肝細胞富集轉錄因子如HNF1、HNF3、HNF4和CEBP等在HBV的轉錄調(diào)控過程中發(fā)揮重要作用，但這些發(fā)現(xiàn)并未完全揭示HBV轉錄調(diào)控的機制。這就提示，可能存在未知的調(diào)控HBV復制的轉錄因子，以及這些已知和未知的轉錄因子之間可能存在著相互作用的網(wǎng)絡關系，共同調(diào)控著HBV轉錄與復制。因此，尋找新的調(diào)控HBV復制的轉錄因子并闡明它們的作用機制，對揭示HBV在體內(nèi)復制的分子機制和尋找新的抗病毒治療靶點具有重要意義?！灸康摹亢Y選調(diào)控乙肝病毒復制的新的轉錄因子，并探討這些轉錄因子在乙肝病毒復制中的作用及其機制，為進一步闡明HBV在體內(nèi)復制的分子機制提供有益的補充，并為尋找新的抗病毒治療靶點提供理論依據(jù)?！痉椒ā?采用轉錄因子活性譜芯片檢測乙肝病毒穩(wěn)定復制的肝癌細胞系HEPG2215及其親本細胞HEPG2轉錄因子活性譜的變化，對照注釋文件，找出活性差異的轉錄因子；2利用酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA方法）對芯片結果進行驗證；3利用免疫細胞化學檢測轉錄因子FOXO3A亞細胞定位；4用WESTERNBLOT檢測細胞中的FOXO3A磷酸化水平；5收集患者乙肝病毒髙復制和低復制肝組織，WESTERNBLOT檢測組織中FOXO3A磷酸化水平，分析FOXO3A的活性和HBV復制之間的關系；6構建FOXO3ASIRNA表達載體，通過細胞轉染，下調(diào)HEPG2215細胞中FOXO3A的表達；7通過實時熒光定量PCR檢測FOXO3ASIRNA對HEPG2215細胞中HBVDNA和MRNA水平的影響，ELISA檢測FOXO3ASIRNA對HBSAG和HBEAG蛋白水平的影響；8克隆HBV啟動子增強子不同截短體，構建含HBV啟動子增強子序列的熒光素酶報告基因載體；報告基因?qū)嶒灆z測FOXO3A對HBV的轉錄活性的影響；9染色質(zhì)免疫共沉淀（CHIP）方法驗證細胞內(nèi)FOXO3A與HBV啟動子或增強子的結合；10EMSA實驗確定HBV啟動子增強子中FOXO3A結合位點；11通過MTT試驗檢測FOXO3ASIRNA對肝癌細胞體外增殖能力的影響；12通過流式細胞術分析FOXO3ASIRNA對肝癌細胞細胞周期的影響，WESTERNBLOT檢測FOXO3ASIRNA轉染的肝癌細胞系細胞周期相關蛋白的表達。【結果】1在芯片注釋文件MATRIX矩陣中查找轉錄因子活性譜芯片中表達差異點所對應的轉錄因子，共篩選出12個轉錄因子家族分子在乙肝病毒穩(wěn)定復制的肝癌細胞系HEPG2215和其親本細胞HEPG2中活性差異明顯＞15倍，其中，在HEPG2215細胞中活性上調(diào)的轉錄因子有HNF134，CEBP，F(xiàn)OXO13A4，F(xiàn)OXI1，SF1，GR，SRY，COUPTF1；活性下調(diào)的轉錄因子有AP1，AP2，SP1234，EGR（123）；其中有5個家族分子尚未報道與HBV復制相關，它們分別是FOXO13A4，EGR（123），F(xiàn)OXI1，SRY，AP2；在這5個家族分子中，以FOXO13A4家族和AP2家族活性差異最為明顯；2ELISA結果顯示與對照細胞HEPG2相比，F(xiàn)OXO13A4在HEPG2215細胞中活性明顯上調(diào)；而AP2在HEPG2215細胞中活性明顯下調(diào)，與芯片結果一致；3免疫熒光細胞化學結果顯示，在HEPG2細胞，F(xiàn)OXO3A主要定位細胞漿，而在HEPG2215細胞，F(xiàn)OXO3A主要定位細胞核；4WESTERNBLOT結果顯示，F(xiàn)OXO3A的磷酸化蛋白水平在HEPG2細胞明顯呈高表達，而在HEPG2215呈低表達，P5WESTERNBLOT檢測組織標本中FOXO3A的磷酸化蛋白水平，結果表明在7例HBV高復制的肝組織中FOXO3A磷酸化水平顯著低于6例低復制肝組織；6將FOXO3ASIRNA表達載體瞬時轉染HEPG2215細胞，WESTERNBLOT結果證實，F(xiàn)OXO3ASIRNA能顯著降低FOXO3A的表達；7實時熒光定量PCR實驗結果顯示，F(xiàn)OXO3ASIRNA能顯著抑制HEPG2215細胞上清和細胞內(nèi)的HBVDNA的水平；8實時熒光定量PCR實驗結果顯示FOXO3ASIRNA能顯著抑制HEPG2215細胞的HBVMRNA的水平；9ELISA的結果表明FOXO3ASIRNA能顯著抑制乙肝病毒HBSAG和HBEAG蛋白水平，并且具有時間依賴性；10通過生物信息學分析，我們發(fā)現(xiàn)，在HBV的啟動子增強子區(qū)域有4個潛在的FRES（FOXO3A的DNA結合序列GCTAAACTAA），將其成功亞克隆入報告基因載體，雙熒光素報告基因結果表明1）FOXO3A可以直接調(diào)控HBV的轉錄活性；2）FOXO3A調(diào)控HBV的轉錄活性的潛在FRE位于FRE1HBV基因組955－1184的區(qū)域內(nèi)；11CHIP實驗進一步證實在HEPG2215細胞內(nèi)FOXO3A同樣可與HBV增強子的結合，結合區(qū)域同報告基因結果HBV基因組955－1184的區(qū)域內(nèi)；12EMSA結果證實FOXO3A通過與HBV增強子Ⅰ序列1127－1134BP（5’GTAAACAA3’）位點結合，增加HBV增強子Ⅰ的活性；13流式細胞術檢測周期發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXO3ASIRNA導致HEPG2215細胞周期進展，WESTERNBLOT結果表明，F(xiàn)OXO3A上調(diào)P27KIP1的表達，而下調(diào)CYCLIND1和CYCLIND2的表達；14生長曲線實驗表明，F(xiàn)OXO3ASIRNA能促進肝癌細胞體外增殖能力?！窘Y論】1宿主細胞轉錄因子在乙肝病毒穩(wěn)定復制的肝癌細胞系和其親本細胞中存在活性差異，眾多已知和未知的轉錄因子可能參與乙肝病毒的復制；2FOXO3A在乙肝病毒感染的細胞和組織中活性增高；3FOXO3A能促進乙肝病毒的體外復制；4FOXO3A促進乙肝病毒復制的分子機制包括兩個方面一是FOXO3A通過與HBV增強子Ⅰ區(qū)域1127－1134BP（5’GTAAACAA3’）位點的結合，增加HBV增強子Ⅰ的活性，促進HBV的轉錄；二是通過上調(diào)P27KIP1，下調(diào)CYCLIND1和CYCLIND2的表達導致細胞周期G1S期阻滯，從而促進乙肝病毒的復制。

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