簡介:乙醇體積分數(shù)為30的鹽酸乙醇溶液作為溶劑,超聲60MIN。鹽酸川芎嗪得率為05604MG/G。超聲提取技術(shù)是近年來應(yīng)用在中草藥有效成分提取分離方面的一種新型技術(shù)。利用超聲波產(chǎn)生的強烈空化效應(yīng)、強烈振動、熱效應(yīng)、攪拌作用,可以加速藥物有效成分進入溶劑,從而提高提取效率,縮短提取時間,節(jié)約溶劑,并且避免了高溫對提取成分的破壞。與常規(guī)的煎煮法、蒸餾法、溶劑浸提法相比,超聲法具有提取溫度低、產(chǎn)物生物活性高、溶劑使用量少、操作簡便、省時節(jié)能等優(yōu)點。因此超聲波技術(shù)在中草藥有效成分提取分離的應(yīng)用研究方面具有重要意義。參考文獻1胡國芬,王建平川芎嗪的藥理作用及臨床應(yīng)用進展J中國藥物與臨床,2006,6107732粱愛群川芎嗪的藥理及機理研究J時珍國醫(yī)國藥,2005,1665323劉永明,李桂芝,張慧,等鹽酸川芎嗪的熒光光譜研究及應(yīng)用J光譜實驗室,2001,1845364趙麗戀,夏新華川芎醇提工藝研究J中成藥,2002,2431735徐偉泉,陳登利,馬潤宇,等大孔樹脂在川芎嗪分離純化過程中的應(yīng)用研究J中國中藥雜志,2004,291111136許惠中藥川芎應(yīng)用與提取工藝的發(fā)展研究J重慶工商大學(xué)學(xué)報自然科學(xué)版,2005,2232337化學(xué)藥品地方標準上升國家標準,第5冊SWS10001HD04552002D51998劉振學(xué),黃仁和,田愛民實驗設(shè)計與數(shù)據(jù)處理,第1版M北京化學(xué)工業(yè)出版社,200562收稿日期2008210215修訂日期2009201206基金項目河南省重大科技攻關(guān)項目NO0422031200河南工業(yè)大學(xué)博士科研基金項目作者簡介張體祥19662,男漢族,河南鄭州人,現(xiàn)任河南工業(yè)大學(xué)講師,主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)的研究工作3通訊作者簡介劉捷19702,女漢族,河南鄭州人,現(xiàn)任河南工業(yè)大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院副教授,博士學(xué)位,主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)的研究工作板藍根多糖的提取和純化工藝研究張體祥,劉捷3,張萍,馬麗,盧奎河南工業(yè)大學(xué)化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院,鄭州河南450001摘要目的研究板藍根水溶性多糖的提取純化工藝條件。方法通過正交實驗,考察液料比、提取時間、提取溫度、醇沉?xí)r間、醇液比對多糖得率的影響。結(jié)果液料比是影響提取工藝的主要因素,最佳工藝條件為液料比30∶1,提取溫度90℃,提取時間6H。三氯乙酸法脫蛋白,葡聚糖凝膠柱層析純化分離。結(jié)論板藍根多糖得率2563,多糖含量7642。純化后的板藍根多糖為分子大小均一的單一組分多糖,不含核酸和蛋白質(zhì)。關(guān)鍵詞板藍根多糖正交試驗提取純化分離中圖分類號R2842文獻標識碼B文章編號10082080520090821992203板藍根為中國傳統(tǒng)中藥,有清熱解毒、涼血利咽的功能。用于瘟毒發(fā)斑、舌絳紫暗、痄腮、喉痹、爛喉丹痧、大頭瘟疫、丹毒、癰腫等癥1。板藍根多糖是板藍根的主要化學(xué)成分之一。研究發(fā)現(xiàn),板藍根多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用,對特異性免疫和非特異性免疫均有一定的促進作用2,3,此外還有降血脂作用。隨著人們對多糖生物活性和特殊藥用功能認識的進一步加深,意識到板藍根多糖可能是板藍根生物活性和特殊藥用功能的主要作用因子之一。目前,板藍根多糖的提取大多采用水煮醇沉法4,5,提取的粗多糖溶液為膠體溶液,性質(zhì)差別很大,提取得率和多糖含量并不理想,這為多糖的的進一步開發(fā)造成了困難。為了提高多糖的活性,本實驗以北板藍根為原料,采用正交實驗對板藍根的提取工藝進行優(yōu)化,對提取的粗多糖脫蛋白,通過SEHADEXG100凝膠色譜柱進一步分離純化,以期為板藍根多糖的開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。1材料板藍根,購自鄭州仟僖堂藥店。2方法21板藍根多糖的提取純化工藝路線6,7其流程如下所示提取板藍根→粉碎→稱量→乙醚脫脂→熱水浸提→離心取上清液→殘渣重復(fù)浸提兩次→合并上清液→減壓濃縮→透析→測含糖量→乙醇沉淀→有機溶劑洗滌→真空干燥→板藍根粗多糖純化粗多糖溶液→SEHADEXG100柱層析→洗脫液濃縮→乙醇沉淀→冷凍干燥→精制板藍根多糖22正交實驗優(yōu)化板藍根多糖的提取工藝選擇液料比、提取溫度和提取時間3個因素,以多糖得率為考察指標進行3因素3水平的正交實驗,對板藍根多糖的提取工藝條件進行優(yōu)化。23多糖含量的測定8苯酚硫酸法,以葡萄糖為基準物作標準曲線。根據(jù)標準曲線計算多糖含量。板藍根多糖得率的計算公式粗多糖得率多糖質(zhì)量板藍根粉末的質(zhì)量10024脫蛋白方法稱取一定量板藍根粗多糖,加入蒸餾水溶脹2H,在100℃下煮沸15H,離心,濃縮。本實驗采用了4種去蛋白方法SEVAGE法在粗多糖濃縮液中加入等體積的一定濃度的氯仿正丁醇溶液,混合振搖,離心除去沉淀,經(jīng)透析、醇沉、洗滌、干燥,即得脫蛋白多糖。三氯乙酸法在粗多糖濃縮液中滴加一定量的三氯乙酸,劇烈攪拌20~30MIN,離心除去沉淀,經(jīng)透析、醇沉、洗滌、干燥,即得脫蛋白多糖。HCL法用HCL調(diào)節(jié)粗多糖濃縮液至PH3,10~20℃靜置過夜,離心除去沉淀液,再透析醇沉、洗滌、干燥,即得脫蛋白多糖。正丁醇三氯乙酸法在粗多糖濃縮液中加入等體積的三氯乙酸正丁醇試劑,振搖10MIN,于分液漏斗中靜置分層,收集下層的水溶液,經(jīng)透析醇沉、洗滌、干燥,即得脫蛋白多糖。25板藍根多糖的純化將一定量的脫蛋白多糖,用蒸餾水溶解后上樣,015MOLL1NACL進行洗脫,流速控制在03MLMIN1,洗脫液由分布收集器進行收集,苯酚硫酸法跟蹤檢測,分別合并出峰的流出液,減壓濃縮至一定體積,醇沉、過濾、干燥,2991時珍國醫(yī)國藥2009年第20卷第8期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL20NO8表34種脫蛋白方法的比較方法去蛋白多糖得率多糖含量A280吸光值SEVAGEE258386970170三氯乙酸法438791460106HCL法414179370252正丁醇三氯乙酸法334292100095382葡聚糖凝膠SEPHADEXG100柱層析純化分離板藍根多糖SEPHADEXG100柱層析純化分離的洗脫曲線如圖6。出現(xiàn)4個洗脫峰,收集其中含量最高所對應(yīng)的5~7號管,透析,濃縮,加入3倍體積95乙醇,離心分離,冷凍干燥,得到板藍根多糖。圖6板藍根多糖的洗脫曲線39純度鑒定對SEPHADEXG100層析柱上純化分離得到的5~7管的板藍根多糖組分在190~800NM范圍進行掃描,結(jié)果見7~8。在260NM和280NM處無核酸和蛋白質(zhì)的特征吸收峰,說明產(chǎn)品中不含核酸和蛋白質(zhì)。經(jīng)SEPHADEXG100柱層析洗脫,所得的峰形狀為對稱的單一峰,表明純化后的板藍根多糖為分子大小均一的單一組分多糖。4結(jié)論利用水煮醇沉法從板藍根中提取水溶性多糖,通過單因素實驗和正交實驗對板藍根多糖的提取工藝進行優(yōu)化,確定的最佳提取條件為液料比30∶1,提取溫度90℃,提取時間6H,板藍根粗多糖的得率為2563,多糖含量達到7642。對脫蛋白方法進行了優(yōu)化,采用三氯乙酸法去蛋白的多糖得率4387,多糖含量9146,脫蛋白效果好。圖7板藍根多糖的紫外可見光譜圖8板藍根多糖純度鑒定的洗脫曲線利用葡聚糖凝膠SEPHADEXG100柱層析對板藍根粗多糖進行純化分離,收集主峰。純化后的板藍根多糖為單一組分多糖,不含核酸和蛋白質(zhì)。這為下一步對板藍根多糖的分離純化和結(jié)構(gòu)的分析奠定了基礎(chǔ)。參考文獻1國家藥典委員會中國藥典S北京化學(xué)工業(yè)出版社,2005102肖姍姍,金郁,孫毓慶板藍根化學(xué)成分、藥理及質(zhì)量控制研究進展J沈陽藥科大學(xué)學(xué)報,2003,2064553許益明板藍根多糖促進免疫功能的實驗研究J中西醫(yī)結(jié)合雜志,1991,1163574陳奎,陳易彬板藍根多糖提取工藝的研究J食品研究與開發(fā),2007,284575馬莉,唐健元,李祖?zhèn)?等板藍根多糖分離純化及其性質(zhì)的研究J中草藥,2007,38811436喬善義,王立巖,趙毅民,等山藥多糖的提取分離和結(jié)構(gòu)測定J中國天然藥物,2003,131557盛家榮,李欣,陳佳偉,等均勻設(shè)計法優(yōu)選南板藍根多糖的提取工藝J中藥材,2005,281211058劉依板藍根有效成分的提取分離及含量測定D中國農(nóng)業(yè)大學(xué),2002歡迎您訂閱人力資源管理雜志經(jīng)國家新聞出版總署正式批準,內(nèi)蒙古日報社主管,中國人事科學(xué)研究院、北京大學(xué)人力資源開發(fā)與管理中心聯(lián)合支持。國際刊號ISSN16738209,國內(nèi)刊號CN151346/F,郵發(fā)代號16293。是我國為數(shù)不多的人力資源部門、企業(yè)高中層領(lǐng)導(dǎo)、教育科研管理和相關(guān)管理的學(xué)術(shù)期刊。學(xué)術(shù)刊辦刊宗旨本刊主要介紹、探討和研究人力資源管理理論與實踐問題,推進人力資源管理的理論建設(shè)和實際應(yīng)用水平,加強教育科研管理,為我國人事制度改革和人力資源能力建設(shè)服務(wù)。學(xué)術(shù)刊主要欄目社科經(jīng)濟人力資源、社科論壇、經(jīng)濟發(fā)展、科學(xué)管理、金融研究、財會審計等。教研管理教育教學(xué)、高等教育、職業(yè)教育、基礎(chǔ)教育、學(xué)術(shù)論壇、圖書館論壇等??茖W(xué)技術(shù)科技論壇、高新技術(shù)、工程技術(shù)、IT技術(shù)、信息科學(xué)、醫(yī)藥研究等。城建研究城建與規(guī)劃、建筑科學(xué)、園林設(shè)計、工程管理、資源環(huán)境、交通管理等。學(xué)術(shù)刊征稿對象人力資源部門工作人員企事業(yè)單位中高級管理人員相關(guān)科研、高校教育機構(gòu)的理論工作者人才交流、管理咨詢機構(gòu)工作人員。學(xué)術(shù)刊投稿須知文章字數(shù)應(yīng)控制在28005600字。本刊一版為2800字左右。1文題20字以內(nèi),可帶副題2姓名可多人署名3單位全稱,所在省、市,郵政編碼4摘要100200字,左頂格5關(guān)鍵詞35個,以“”號隔開,左頂格6文題英譯來稿兩周內(nèi)未接到回復(fù)者請速來函來電查詢經(jīng)審核合格收到“錄用通知”后滿3個月仍未收到樣刊者僅限第一作者,請速來函來電查詢,不符合錄取條件的文章本刊不退稿件。聯(lián)系電話01060896999/60895999編輯邱建霞手機13146961719郵箱CNKI11126COM通訊地址北京市西外大街100044123號信箱郵編100044本刊網(wǎng)址WWWRLZYGLZZCOM中華人民共和國新聞出版總署HTTP//WWWGAPPGOVCN中國核心期刊遴選數(shù)據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