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簡(jiǎn)介：目的探討磁共振增強(qiáng)劑超順磁性納米鐵顆粒SUPERPARAMAGICIRONOXIDE，SPIOFERIDEX標(biāo)記人FLK1CD31CD34間充質(zhì)干細(xì)胞HUMANMESENCHYMALSTEMCELLS，HMSCS對(duì)其表型、細(xì)胞活性、增殖能力及向神經(jīng)方向分化能力的影響，為磁共振成像技術(shù)追蹤磁標(biāo)記移植細(xì)胞提供可靠的理論依據(jù)。方法使用轉(zhuǎn)染劑介導(dǎo)法標(biāo)記，以含F(xiàn)ERIDEX50ΜGML及多聚賴氨酸POLYLYSINE，PLL15ΜGML的培養(yǎng)基與HMSCS共同孵育1218小時(shí)。FEFIDEX標(biāo)記后行普魯士藍(lán)染色測(cè)定標(biāo)記率及標(biāo)記效率隨細(xì)胞數(shù)目和時(shí)間產(chǎn)生的變化、透射電鏡觀察細(xì)胞內(nèi)鐵顆粒分布。通過臺(tái)盼藍(lán)染色、生長(zhǎng)曲線測(cè)定及流式細(xì)胞儀檢測(cè)FERIDEX對(duì)細(xì)胞活性、生長(zhǎng)能力及細(xì)胞表型的影響。采用化學(xué)誘導(dǎo)法10MMOLLΒ巰基乙醇及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)法100NGML堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子在體外誘導(dǎo)HMSCS向神經(jīng)方向分化。免疫熒光方法檢測(cè)誘導(dǎo)后對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組HMSCS神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特異標(biāo)記物NF、MAP2、GFAP和GALC的表達(dá)，通過IMAGEPROPLUS60軟件測(cè)定熒光OD值，比較兩組間差異。結(jié)果使用含F(xiàn)ERIDEX50ΜGML及PLL15ΜGML的培養(yǎng)基標(biāo)記HMSCS，標(biāo)記效率可達(dá)96％。電鏡檢測(cè)顯示，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胞內(nèi)可見黑色顆粒，以胞漿為主，細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)與對(duì)照組相比無顯著性差異。標(biāo)記后對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞活性均超過97％；流式細(xì)胞儀檢測(cè)，對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞CD44、CD105、FLK1均為陽(yáng)性，CD31、CD34均為陰性。FERIDEX標(biāo)記后1周，細(xì)胞生長(zhǎng)能力及活性與對(duì)照組相比無顯著性差異。FERIDEX標(biāo)記效率隨觀察時(shí)間延長(zhǎng)及細(xì)胞數(shù)目增加而逐步下降。化學(xué)誘導(dǎo)法誘導(dǎo)后兩組細(xì)胞均表達(dá)NF，MAP2及GFAP均為陰性；神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子誘導(dǎo)法誘導(dǎo)后兩組細(xì)胞NF、GFAP、GALC均為陽(yáng)性。兩種方法誘導(dǎo)HMSCS向神經(jīng)方向分化后，測(cè)定NF、MAP2、GFAP、GALC免疫熒光OD值，二組間OD值無顯著性差異。結(jié)論1、采用FERIDEX50ΜGML及PLL15ΜGML可有效標(biāo)記HMSCS。2、FERIDEX標(biāo)記效率隨時(shí)間延長(zhǎng)及細(xì)胞數(shù)目增多逐漸下降。3、FERIDEX對(duì)HMSCS增殖能力、細(xì)胞活性、細(xì)胞表型及向神經(jīng)方向分化能力均無顯著性影響。FERIDEX作為磁共振活體示蹤劑，是安全、高效的。

簡(jiǎn)介：江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文YB1在血液系統(tǒng)腫瘤中的表達(dá)及其對(duì)耐藥白血病細(xì)胞生物學(xué)特性的影響姓名周磊磊申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師許文林20070609江蘇大學(xué)碩士論文V檢測(cè)白血病細(xì)胞的凋亡程度；采用MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后化療藥物的IC50值變化，RTPCR和流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞中的MDRLMRNA和PGP表達(dá)的變化；采用基因芯片技術(shù)比較陽(yáng)性轉(zhuǎn)染組與對(duì)照組細(xì)胞的基因表達(dá)的差異。結(jié)果DLBCL組與RLH組的YB1胞漿陽(yáng)性表達(dá)率無明顯差異E0763，而DLBCL組的YB1胞核陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于RLH組尸O05；DLBCL臨床III～Ⅳ期、結(jié)外淋巴組織侵犯及骨髓浸潤(rùn)患者的YB1胞核陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于I～I(xiàn)I期、結(jié)內(nèi)病變及無骨髓浸潤(rùn)患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO05；DLBCL組與RLH組均出現(xiàn)PGP的表達(dá)，兩組的總體表達(dá)率無明顯差異∽O05，PGP的表達(dá)強(qiáng)度與DLBCL患者的性別、年齡、臨床分期、結(jié)內(nèi)外浸潤(rùn)及有無骨髓浸潤(rùn)無明顯相關(guān)性PO05；YB1的核陽(yáng)性表達(dá)與PGP的表達(dá)強(qiáng)度70950，P0005及PCNA積分尸O930，P0005均呈正相關(guān)；化療有效組的YB1核陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于化療無效組EO038化療有效組的PGP表達(dá)強(qiáng)度顯著低于化療無效組PO001。針對(duì)YB1第5B顯子325343、381399和430448位點(diǎn)設(shè)計(jì)的三個(gè)SHRNA片段和隨機(jī)片段HK成功克隆KPGENESIL一1質(zhì)粒中，產(chǎn)生重組質(zhì)粒PGENSIL一1／U6／YBXL1，PGENSIL1FU6／YBXL2，PGENSIL1／U6／YBXL3及PGENSIL1FU6／HK，酶切及Ⅸ蛆測(cè)序分析顯示，重組質(zhì)粒SHRNA編碼序列與設(shè)計(jì)片斷的序列完全一致。成功構(gòu)建了針對(duì)YB1的特異性SHRNA真核表達(dá)載體。通過脂質(zhì)體法將YB1S樅和HK重組載體轉(zhuǎn)染進(jìn)K562／A02細(xì)IL

簡(jiǎn)介：APRIL2011原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對(duì)本人的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者氧珈日期年月日＼J學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者氣體復(fù)制手段保留論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作霉昂日期年月日

簡(jiǎn)介：甘露聚糖結(jié)合凝集素MANNANBINDINGLECTIN，MBL是哺乳動(dòng)物C型凝集素超級(jí)家族中膠凝素家族成員，主要由肝細(xì)胞分泌，作為糖蛋白存在于血漿中。通過其糖識(shí)別域CARBOHYDRATERECOGNITIONDOMAIN，CRD識(shí)別病原體表面糖結(jié)構(gòu)，通過其膠原樣區(qū)COLLAGENLIKEREGION，CLR與2個(gè)MBL相關(guān)絲氨酸蛋白酶MBLASSOCIATEDSERINEPROTEASE，MASP1，MASP2結(jié)合，以不依賴抗體和C1Q的凝集素途徑激活補(bǔ)體，發(fā)揮溶破和間接調(diào)理功能，還能與吞噬細(xì)胞表面膠凝素受體結(jié)合而起直接調(diào)理作用。MBL的識(shí)別譜廣泛，在天然免疫中發(fā)揮重要作用。MBL基因在人群中突變頻率極高，已知3個(gè)MBL結(jié)構(gòu)基因點(diǎn)突變可導(dǎo)致MBL蛋白空間結(jié)構(gòu)改變，與糖基配體和MASPS結(jié)合的能力降低，補(bǔ)體凝集素激活途徑幾乎完全消失，臨床上表現(xiàn)為各種病原體的急慢性反復(fù)感染。人血漿MBL含量極低，從血漿中大量提取MBL用于科研和臨床，花費(fèi)昂貴。通過基因工程、細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)，體外大規(guī)模制備MBL，將為進(jìn)一步研究MBL，在免疫系統(tǒng)中的作用以及臨床上MBL缺損的治療提供條件。本課題組曾成功構(gòu)建了兩個(gè)野生型MBL，真核表達(dá)載體，PCDNA31MBL和PCDNA4HISMAXCMBL，并用電穿孔法分別轉(zhuǎn)染入CHO、HEK293和HEPG2細(xì)胞，經(jīng)G418和ZEOCIN選擇轉(zhuǎn)染子并克隆化培養(yǎng)，獲得表達(dá)重組人MBL的細(xì)胞株。通過RTPCR和ELISA等方法分析比較，發(fā)現(xiàn)PCDNA31MBL在CHO和HEK293細(xì)胞中能夠大量合成RNA，其表達(dá)效率顯著高于其他載體和細(xì)胞的組合。因此，本研究采用本室保存的已轉(zhuǎn)染了PCDNA31MBL真核表達(dá)載體的CHO細(xì)胞株進(jìn)行為期2個(gè)月的篩選，通過ELISA技術(shù)篩選高表達(dá)單克隆細(xì)胞株，然后擴(kuò)大培養(yǎng)，分離純化其表達(dá)的蛋白產(chǎn)物，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行深入研究。一、雙抗夾心ELISA體系的建立用抗MBLCRD單克隆抗體捕獲，辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗MBLCLR多克隆抗體檢測(cè)，以丹麥AARHUS大學(xué)JENSCHRJENSENIUS教授贈(zèng)送的重組人MBL蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)品，來篩選細(xì)胞培養(yǎng)上清中目的蛋白含量較高的細(xì)胞株，以獲得高表達(dá)重組人MBL蛋白的細(xì)胞克隆。該檢測(cè)體系靈敏度可達(dá)01MGL。二、篩選穩(wěn)定高效表達(dá)重組人MBL蛋白的細(xì)胞株本課題組已構(gòu)建了含PCDNA31MBL真核表達(dá)載體的CHO細(xì)胞。將其復(fù)蘇后，在96孔板中單克隆化，待細(xì)胞克隆長(zhǎng)至孔底的14后，挑取細(xì)胞株置12孔板內(nèi)培養(yǎng)24H后，以800MGL的G418加壓篩選。隨后的1個(gè)月中，每隔3～5天換液一次，維持G418濃度為800MGL。然后，通過雙抗夾心ELISA體系篩選得到6株高表達(dá)的單克隆細(xì)胞株，其上清中目的蛋白濃度均在3MGL以上。RTPCR分析表明，這些轉(zhuǎn)染了MBL基因的CHO細(xì)胞能穩(wěn)定轉(zhuǎn)錄MBLMRNA。三、重組人MBL蛋白的純化及其生物學(xué)特性研究利用硫酸銨沉淀法初步純化表達(dá)產(chǎn)物，鼠抗人MBLCRDMAB親和層析柱進(jìn)一步純化，獲得重組人MBL蛋白。在1L培養(yǎng)上清中可獲得2MG左右目的蛋白。經(jīng)ELISA鑒定，純化后的蛋白產(chǎn)物可與抗MBL單克隆抗體、抗MBLCRD單克隆抗體、抗MBLCIR多克隆抗體結(jié)合。通過非還原SDSPAGE和WESTERNBLOT分析，重組人MBL分子量多集中在MR200000以上，為三至六聚體形式。結(jié)合實(shí)驗(yàn)證明所純化的重組MBL，蛋白能與甘露聚糖及重組MASP蛋白有效結(jié)合；C4D沉積實(shí)驗(yàn)表明重組人MBL蛋白和血漿來源MBL均能有效介導(dǎo)補(bǔ)體激活，而這種介導(dǎo)作用可被競(jìng)爭(zhēng)性糖類抑制。另外，用C4D沉積試驗(yàn)檢測(cè)保存于不同溫度下6個(gè)月的重組蛋白介導(dǎo)補(bǔ)體激活的功能，發(fā)現(xiàn)其穩(wěn)定性良好，活化補(bǔ)體活性無明顯降低。

簡(jiǎn)介：ZHENGZHOUUNIVERSITYFORTHEDEGREEOFMASTEREFFECTSOF1，25一OH2D3ONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFPORCINEAMELOBLASTSBYXIANLIZENGSUPERVISORPROFHONGYUZHAOSTOMATOLOGYMEDICALSCHOOLMAY2010原創(chuàng)性聲明㈣㈣IIILL㈣IHILL舢ILIII洲UIIILL㈣11IIIIY1832932本人學(xué)位論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立撰寫并完成的，學(xué)位論文沒有剽竊、抄襲等違反學(xué)術(shù)道德、學(xué)術(shù)規(guī)范的侵權(quán)行為，否則，本人愿意承擔(dān)由此產(chǎn)生的一切法律責(zé)任和法律后果，特此聲明。學(xué)位論文懈穆鈾?quán)?啪年石月匆日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文憾曾鉑嗍2Ⅲ年∥肌日

簡(jiǎn)介：分類號(hào)分類號(hào)R57R57學(xué)校代碼學(xué)校代碼1039210392學(xué)科專業(yè)代碼學(xué)科專業(yè)代碼100201100201學(xué)號(hào)號(hào)21210032752121003275密級(jí)級(jí)碩士學(xué)位學(xué)位論文論文微小微小RNA423RNA4235P5P調(diào)控三葉因子調(diào)控三葉因子1基因表達(dá)及對(duì)胃黏膜基因表達(dá)及對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞上皮細(xì)胞生物學(xué)行為生物學(xué)行為影響影響EFFECTSOFMIRNA4235PONTREFOILFACTOR1EXPRESSIONANDONBIOLOGICALBEHAVIOROFGASTRICMUCOSALEPITHELIALCELLS學(xué)位類型型醫(yī)學(xué)碩士醫(yī)學(xué)碩士所在學(xué)院院協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院協(xié)和臨床醫(yī)學(xué)院申請(qǐng)人姓名申請(qǐng)人姓名陳國(guó)彬陳國(guó)彬?qū)W科學(xué)科、專業(yè)專業(yè)內(nèi)科學(xué)（消化）內(nèi)科學(xué)（消化）導(dǎo)師師任建林任建林教授教授研究起止日期研究起止日期20132013年7月至月至20152015年4月答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)主席王小眾王小眾教授教授答辯日期期20152015年0505月1111日二○一五○一五年四月福建醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文II目錄附錄附錄1中文摘要中文摘要3英文摘要英文摘要4第1章前言前言611三葉因子612MIRNA與TFFS表達(dá)調(diào)控7第2章材料和方法材料和方法1021實(shí)驗(yàn)材料10211組織標(biāo)本10212細(xì)胞株10213引物10214主要實(shí)驗(yàn)試劑10215主要儀器耗材11216主要試劑的制備1122實(shí)驗(yàn)方法13221細(xì)胞培養(yǎng)13222瞬時(shí)轉(zhuǎn)染14223RNA提取與RTPCR15224實(shí)時(shí)熒光定量PCR19225WESTERNBLOT蛋白印跡21226HE染色技術(shù)22227免疫組織化學(xué)技術(shù)23228MTT25229EDU252210集落實(shí)驗(yàn)262211劃痕實(shí)驗(yàn)27

簡(jiǎn)介：腦膠質(zhì)瘤是人類中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的腫瘤之一，在成人和兒童5060％的顱內(nèi)腫瘤都是腦膠質(zhì)瘤，腦膠質(zhì)瘤發(fā)生率大概642例100000。腦膠質(zhì)瘤患者5年存活率不到30％。本研究首次探討了KIF2A基因在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)情況并通過體外實(shí)驗(yàn)研究了KIF2A基因在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移，侵襲，增殖和凋亡中的作用及分子機(jī)制最后初步探討了KIF2A基因和在腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移過程中起到非常重要作用的HIF1Α基因的關(guān)系。第一部分KIF2A在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義目的研究KIF2A在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及臨床意義。方法標(biāo)本收集收集遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院2008～2013年間原發(fā)性腦膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本35例，另收集2014年山東大學(xué)齊魯醫(yī)院神經(jīng)外科住院患者手術(shù)切除的新鮮腦膠質(zhì)瘤組織35例，作為實(shí)驗(yàn)組。且所有患者術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療等其他治療，并與患者或監(jiān)護(hù)人簽署實(shí)驗(yàn)知情同意書后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)進(jìn)行研究。同時(shí)取20例正常尸檢的腦組織標(biāo)本做為對(duì)照組。所有入組組織標(biāo)本按照WHO2000標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，ⅠⅡ級(jí)15例，ⅢⅣ級(jí)20例男23例，女12例平均年齡（470歲）。1應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)高級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織，不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織KIF2A蛋白的表達(dá)情況。探討在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織及不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織中KIF2A蛋白的表達(dá)情況及相互關(guān)系。2應(yīng)用REALTIMEPCR法檢測(cè)新鮮腦膠質(zhì)瘤組織中KIF2A的MRNA表達(dá)情況與臨床病理參數(shù)的關(guān)系。探討在不同級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織中KIF2A的MRNA表達(dá)情況及相互關(guān)系。結(jié)果免疫組化結(jié)果顯示35例高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織和20例正常腦組織中都有KIF2A的陽(yáng)性表達(dá)，與正常腦組織比較，高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織表達(dá)率高于正常腦組織，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P0001。免疫組化檢測(cè)35例不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織，高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤組織表達(dá)率高于低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤P0044。KIF2A蛋白主要表達(dá)在胞質(zhì)及胞核，呈棕黃色顆粒，在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞胞漿中染色較強(qiáng)，在低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞和正常腦組織細(xì)胞中染色較淺。REALTIMEPCR法檢測(cè)新鮮膠質(zhì)瘤組織中KIF2A的MRNA表達(dá)。KIF2A表達(dá)隨著腦膠質(zhì)瘤級(jí)別增高而增強(qiáng)P0033。結(jié)論KIF2A在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中強(qiáng)表達(dá)，在低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤和正常腦組織弱表達(dá)。KIF2A的表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)，臨床分期相關(guān)。第二部分KIF2A基因沉默對(duì)腦膠質(zhì)瘤A172增殖、凋亡、侵襲遷移的影響目的探討SIRNA介導(dǎo)的KIF2A基因沉默對(duì)腦膠質(zhì)瘤A172細(xì)胞系細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲遷移能力的影響探討KIF2A基因沉默后抑制人膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、侵襲及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。方法1人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株篩選腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172和U251細(xì)胞常規(guī)進(jìn)行復(fù)蘇，傳代，獲取細(xì)胞，37℃，5％C02飽和濕度條件下，在含10％胎牛血清和DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)，提取A172和U251細(xì)胞的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成CDNA，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，確定人腦膠質(zhì)瘤A172細(xì)胞作為研究對(duì)象。2質(zhì)粒干擾率的測(cè)定將細(xì)胞分KIF2ASIRNA組和SCRAMBLEDSIRNA對(duì)照組，將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的A172細(xì)胞以2105數(shù)目接種于6孔培養(yǎng)板中。用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000分別轉(zhuǎn)染KIF2ASIRNA和SCRAMBLEDSIRNA。轉(zhuǎn)染后48H，收集細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA和總蛋白，應(yīng)用RTPCR方法檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組中KIF2A的基因表達(dá)。應(yīng)用WESTERNBLOT方法檢測(cè)不同實(shí)驗(yàn)組中KIF2A的蛋白表達(dá)。分析不同實(shí)驗(yàn)組中A172細(xì)胞KIF2A的基因、蛋白表達(dá)情況。評(píng)價(jià)KIF2ASIRNA組干擾效率。3利用CCK8檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)腦人膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞增殖能力的影響分別將指數(shù)生長(zhǎng)期A172KIF2ASIRNA組和對(duì)照組細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后按1104個(gè)孔接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，培養(yǎng)3天，于第0、24、48和72H，采用CCK8方法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況。4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞的凋亡率變化取各組細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后按2105孔接種于12孔板中，待細(xì)胞融合至約80％，收集細(xì)胞，ANNEXINⅤ和PI染色后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率變化。5TRANSWELL小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞侵襲遷移能力的影響。取各組無血清A172細(xì)胞懸液100ΜL加入小室的上室，下室加入600ΜL含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)16H。光鏡下計(jì)數(shù)侵襲到濾膜背面的穿膜細(xì)胞數(shù)，評(píng)價(jià)細(xì)胞的侵襲遷移能力。6明膠酶譜法檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞A172細(xì)胞MMP2、MMP9的表達(dá)的影響。7WESTERNBLOT檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172細(xì)胞PI3KAKT和MAPKERK信號(hào)通路的影響。8WESTERNBLOT檢測(cè)KIF2A基因沉默對(duì)人腦膠質(zhì)瘤A172細(xì)胞MMP2、MMP9蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果1KIF2ASIRNA能夠有效下調(diào)KIF2A的表達(dá)。QRTPCR檢測(cè)KIF2ASIRNA敲除24H，48H時(shí)A172細(xì)胞中KIF2A的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)48H的敲除效率高P0003。WESTERNBLOT進(jìn)一步驗(yàn)證A172細(xì)胞中KIF2ASIRNA較對(duì)照組敲除48H時(shí)的效率高。2CCK8法檢測(cè)KIF2A敲除對(duì)A172細(xì)胞增殖的影響。發(fā)現(xiàn)隨著時(shí)間延長(zhǎng)，A172細(xì)胞KIF2ASIRNA敲除組增殖率顯著低于對(duì)照組。3ANNEXINⅤPI法檢測(cè)KIF2ASIRNA及SCRAMBLEDSIRNA兩組敲除48H時(shí)A172細(xì)胞凋亡率。發(fā)現(xiàn)KIF2A敲除組較對(duì)照組相比，KIF2A敲除組顯著上調(diào)A172的凋亡率P＜00001。4TANSWELL小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示KIF2ASIRNA敲除組A172細(xì)胞侵襲遷移顯著低于對(duì)照組。5明膠酶譜檢測(cè)發(fā)現(xiàn)KIF2ASIRNA敲除組上清中MMP2、MMP9的活性顯著低于SCRAMBLEDSIRNA組。6WESTERNBLOT分析發(fā)現(xiàn)KIF2ASIRNA敲除組中，與膠質(zhì)瘤細(xì)胞侵襲、遷移相關(guān)的AKT磷酸化水平下調(diào)MMP2蛋白表達(dá)水平下調(diào)。與膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖相關(guān)的P38MAPK磷酸化水平下調(diào)。結(jié)論1KIF2ASIRNA能夠有效的抑制A172細(xì)胞中KIF2A的表達(dá)，KIF2A基因沉默后A172細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力明顯降低，凋亡水平升高。2KIF2A通過PI3KAKT和MAPKERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為中起著重要的作用。3KIF2A通過MMP調(diào)控人腦膠質(zhì)瘤的侵襲轉(zhuǎn)移能力。第三部分HIF1Α在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)和意義及和KIF2A的關(guān)系目的研究HIF1Α在腦膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)及臨床意義，并分析其與KIF2A之間的關(guān)系。方法收集山東大學(xué)齊魯醫(yī)院神經(jīng)外科20132014年住院患者手術(shù)切除的新鮮腦膠質(zhì)瘤組織35例，所有標(biāo)本病理證實(shí)是人腦膠質(zhì)瘤組織并制備成石蠟切片，所有患者均為原發(fā)性，術(shù)前未行放療、化療和其他治療，所有患者及監(jiān)護(hù)人被告知進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。所有患者組織標(biāo)本診斷按照WHO2000標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí)，ⅠⅡ級(jí)15例，ⅢⅣ級(jí)20例男23例，女12例平均年齡（470歲）。應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織HIF1Α蛋白的表達(dá)情況。檢測(cè)在不同級(jí)別的腦膠質(zhì)瘤組織中HIF1Α蛋白的表達(dá)情況，并探討KIF2A與HIF1Α在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)相關(guān)性。結(jié)果1HIF1Α蛋白表達(dá)與臨床資料之間的關(guān)系。免疫組化結(jié)果顯示HIF1Α蛋白主要在細(xì)胞核和細(xì)胞漿中染色。35例腦膠質(zhì)瘤組織中HIF1Α蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率是686％，20例ⅢⅣ腦膠質(zhì)瘤切片中，17853％例表達(dá)陽(yáng)性，3147％例陰性表達(dá)。15例ⅠⅡ腦膠質(zhì)瘤切片中，7467％例表達(dá)陽(yáng)性，8533％例陰性表達(dá)。HIF1Α蛋白在Ⅱ低級(jí)別和ⅢⅣ高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤表達(dá)有差異性P0027。HIF1Α在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)隨著腫瘤級(jí)別增高而成上升趨勢(shì)P＜005，HIF1Α在腦膠質(zhì)瘤表達(dá)與患者年齡，性別、腫瘤大小及發(fā)生部位無關(guān)。2KIF2A和HIF1Α蛋白在腦膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)相關(guān)性。免疫組化檢測(cè)腦膠質(zhì)瘤中KIF2A和HIF1Α蛋白表達(dá)無差異性P033。結(jié)論HIF1Α蛋白在高級(jí)別腦膠質(zhì)瘤中強(qiáng)表達(dá)，在低級(jí)別腦膠質(zhì)瘤弱表達(dá)。HIF1Α的表達(dá)水平與腦膠質(zhì)瘤的病理分級(jí)，臨床分期相關(guān)。HIF1Α蛋白可作為評(píng)價(jià)腦膠質(zhì)瘤臨床指標(biāo)的一個(gè)重要因子。KIF2A和HIF1Α蛋白在腦膠質(zhì)瘤的轉(zhuǎn)移過程中均可能化起到正調(diào)控作用，但兩者之間可能不存在相關(guān)性，其機(jī)制尚待進(jìn)一步研究明確

簡(jiǎn)介：浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文NNMT過表達(dá)對(duì)大腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及意義研究姓名張鈞申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師何超20100408浙江大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要方法1．通過分子克隆技術(shù)構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX．4T2／NNMT和真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA3．1／NNMT。2．利用基因工程制備NNMT蛋白，并作為免疫原免疫小鼠制備NNMT單克隆抗體，并建立基于此單克隆抗體的WESTERN．BLOT、免疫組化等實(shí)驗(yàn)方法。3．采用RTPCR和WESTERN．BLOT分析多株結(jié)直腸癌細(xì)胞系的NNMT表達(dá)，篩選NNMT無／低表達(dá)和高表達(dá)株。4．把PCDNA3．1／NNMT轉(zhuǎn)入COLO320和SW480細(xì)胞株，用G418來篩選轉(zhuǎn)入目的基因的細(xì)胞，建立相應(yīng)的NNMT高表達(dá)腫瘤細(xì)胞模型和空質(zhì)粒PCDNA3．1轉(zhuǎn)染的對(duì)照模型。5．通過NNMT高表達(dá)腫瘤細(xì)胞模型，結(jié)合RNA干擾技術(shù)，MTT法分析NNMT對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和化療藥物敏感試驗(yàn)、流式細(xì)胞儀分析凋亡和細(xì)胞周期、用TRANSWELL細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)和MATRIGEL基質(zhì)浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn)研究NNMT對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移和侵潤(rùn)等生物學(xué)功能的影響。6．用AFFIMETRIXGENEEXPRESSION芯片比較NNMT基因?qū)肭昂蟠竽c癌細(xì)胞的基因表達(dá)差異，分析NNMT下游效應(yīng)分子和作用機(jī)制。7．采用免疫組化檢測(cè)組織NNMT與結(jié)直腸癌的臨床病理的關(guān)系。結(jié)果1．構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒PGEX．4T2／NNMT和真核表達(dá)質(zhì)粒PCDNA3．1／NNMT,并通過了酶切和測(cè)序驗(yàn)證。2．50用基因工程制備的NNMT蛋白作為免疫原免疫小鼠制備了能穩(wěn)定分泌抗NNMT單克隆抗體的4個(gè)細(xì)胞株，該NNMT單克隆抗體具有很好的特異性和反應(yīng)性，并建立了基于此單克隆抗體的WESTERN．BLOT、免疫組化等實(shí)驗(yàn)方法。3．對(duì)多株大腸癌細(xì)胞系HT29、SW480、COLO320、SW620、HCTLL6、HCE8693的NNMT的MRNA和蛋白表達(dá)進(jìn)行了分析，RTPCR結(jié)果顯示除SW480外，其余細(xì)胞均能檢測(cè)到MRNA，其中COLO320表達(dá)水平最高。WESTERNIII

簡(jiǎn)介：本文應(yīng)用膽總管結(jié)扎法建立膽汁淤積性大鼠肝纖維化模型，檢測(cè)腎上腺素受體各亞型的表達(dá)與肝纖維化發(fā)展的關(guān)系；進(jìn)一步在細(xì)胞水平分別給予去甲腎上腺素Α受體及Β受體的阻滯劑，檢測(cè)其對(duì)HSCS增殖、凋亡以及膠原代謝的作用，并探討交感神經(jīng)遞質(zhì)調(diào)控HSCS生物學(xué)行為的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，旨在闡明交感神經(jīng)系統(tǒng)在肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制，從而尋求有效的預(yù)防和治療肝纖維化的新思路、新策略。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容主要包括以下四部分第一部分肝纖維化過程中去甲腎上腺素各受體亞型表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化目的研究肝纖維化過程中去甲腎上腺素各受體亞型表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化。方法膽總管結(jié)扎法建立膽汁淤積性大鼠肝纖維化模型，HE、MASSON染色觀察肝臟病理形態(tài)學(xué)變化，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HSCS活化指標(biāo)ΑSMA的表達(dá)，WESTERNBLOT和REALTIMEQPCR檢測(cè)ΑAR、Β1AR、Β2AR蛋白和MRNA的表達(dá)。結(jié)果①術(shù)后大鼠一般情況觀察大鼠膽總管結(jié)扎后1H～2H恢復(fù)活動(dòng)，48H左右尿液變黃，3～4天后皮膚毛發(fā)開始轉(zhuǎn)黃，精神逐漸變差，進(jìn)食量少于對(duì)照組，體重增加不明顯或稍有下降。5～6天一般狀況漸差，嗜睡，反應(yīng)遲緩，活動(dòng)減少，黃疸明顯，鼠糞呈灰白色。20天后進(jìn)食量明顯減少，體重與對(duì)照組相比明顯降低，并且部分大鼠逐漸出現(xiàn)腹部隆起。②肝組織病理組織學(xué)變化模型大鼠肝臟肉眼觀呈褐綠色或棕色，表面略呈細(xì)顆粒狀，質(zhì)地變硬。HE及MASSON三色染色顯示，假手術(shù)對(duì)照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝板排列整齊，肝細(xì)胞無腫脹，無膽管增生，無淤膽及淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，核仁清晰，少量結(jié)締組織局限于門管區(qū)。造模1WK后，模型組肝細(xì)胞出現(xiàn)散在變性、壞死及炎細(xì)胞浸潤(rùn)，部分區(qū)域出現(xiàn)小片狀壞死，門管區(qū)小膽管樣上皮細(xì)胞增生。造模2WK后，模型組肝板正常排列消失，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，門管區(qū)小膽管廣泛增生，并向小葉內(nèi)延伸、肝小葉呈花環(huán)狀；新生小膽管周圍纖維組織增生，門管區(qū)面積擴(kuò)大，肝小葉內(nèi)亦有纖維組織增生。造模3WK～4WK后，模型組肝臟廣泛纖維結(jié)締組織增生，增生的纖維間隔互相連接、包繞、分割，改建原來的肝小葉甚至形成假小葉。MASSON三色染色膠原面積密度測(cè)定結(jié)果顯示模型組1WK、2WK、3WK、4WK膠原面積密度1011％±114％，2114％±122％，2887％±205％，3744％±317％均顯著高于假手術(shù)對(duì)照組322％±077％，P001。③ΑSMA免疫組織化學(xué)染色顯示正常大鼠肝組織中僅在血管壁平滑肌細(xì)胞有弱陽(yáng)性表達(dá)；隨著肝纖維化的發(fā)展，大鼠肝組織中ΑSMA陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多，主要分布于匯管區(qū)、纖維間隔、肝竇周圍及增生的膽管周圍細(xì)胞，造模1WK～4WK大鼠肝組織ΑSMA的陽(yáng)性面積1058％±175％，2414％±202％，2974％±259％，3428％±201％均顯著高于假手術(shù)組412％±151％，P001。即肝纖維化程度越重ΑSMA染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量亦越多。④WESTERNBLOT檢測(cè)結(jié)果顯示，分別在大約57KD、50KD、47KD位置出現(xiàn)ΑAR、Β1AR、Β2AR特異性條帶，在43KD位置可見ΒACTIN條帶。假手術(shù)組有少量腎上腺素受體蛋白表達(dá)，隨著肝纖維化進(jìn)展其表達(dá)逐漸增加，造模1WK～4WK大鼠肝組織ΑAR、Β1AR、Β2AR蛋白表達(dá)量明顯升高154±008，187±015，272±009，284±018VS085±012，P005；157±018，192±011，251±017，289±019VS098±015，P005；184±020，197±009，285±014，387±018VS124±018，P005。⑤REALTIMEQPCR共擴(kuò)增檢測(cè)ΑAR、Β1AR、Β2AR和內(nèi)參照GAPDH基因表達(dá)，根據(jù)△CT實(shí)驗(yàn)組CT目的基因CTGAPDH，ACT對(duì)照組CT目的基因CTGAPDH，△△CT△CT實(shí)驗(yàn)組△CT對(duì)照組，目的基因的相對(duì)表達(dá)量FOLDS2△△CT計(jì)算ΑAR、Β1AR、Β2ARMRNA相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果證實(shí)，隨著肝纖維化的發(fā)展，ΑAR、Β1AR、Β2ARMRNA表達(dá)逐漸上調(diào)，造模4WK表達(dá)最多154±008，298±009，323±011，394±013VS100±007，P001；147±010，213±009，254±012，281±010VS100±010，P001；124±O07，278±010，354±014，424±015VS100±008，P001。⑥ΑSMA與ΑAR、Β1AR、Β2AR的多元相關(guān)分析顯示，ΑSMA與ΑAR、Β1AR及Β2AR呈正相關(guān)，R值分別為0564、0753和0606。結(jié)論膽總管結(jié)扎法成功建立膽汁淤積性大鼠肝纖維化模型，肝纖維化形成過程中HSCS大量活化、增殖，ΑSMA表達(dá)增加。隨著肝纖維化進(jìn)展，ΑAR、Β1AR、Β2AR蛋白及MRNA含量明顯增加，與ΑSMA呈明顯的正相關(guān)。第二部分交感神經(jīng)遞質(zhì)NE對(duì)HSCS生物學(xué)行為的影響目的探討交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素對(duì)體外培養(yǎng)的肝星狀細(xì)胞增殖、凋亡及膠原代謝的影響。方法體外培養(yǎng)HSCS，用四甲基偶氮唑鹽MTT法檢測(cè)NE對(duì)HSCS增殖的影響；原位雜交凋亡檢測(cè)TUNEL法觀察NE對(duì)HSCS凋亡的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞凋亡調(diào)控基因BCL2和BAX的蛋白表達(dá)情況；倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；用REALTIMEQPCR檢測(cè)I型膠原MRNA的表達(dá)；并用WESTERNBLOT和REALTIMEQPCR檢測(cè)MMP13和TIMP1蛋白和MRNA的表達(dá)。結(jié)論交感神經(jīng)遞質(zhì)NE對(duì)體外活化的HSCS具有促進(jìn)增殖和抑制凋亡的作用，并引起凋亡調(diào)控基因BAX表達(dá)下降，而BCL2表達(dá)增加。NE還可以使HSCSMMP13表達(dá)降低，TIMP1表達(dá)升高，進(jìn)而降低MMP13TIMP1比值，從而減少其對(duì)肝臟膠原降解的作用，使HSCSⅠ型膠原表達(dá)量增加，從而加速肝纖維化的進(jìn)展。第三部分去甲腎上腺素各受體亞型對(duì)HSCS生物學(xué)行為的調(diào)控作用目的探討交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素各受體亞型對(duì)肝星狀細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法體外培養(yǎng)HSCS，WESTERNBLOT檢測(cè)HSCS腎上腺素受體ΑAR、Β1AR及Β2AR蛋白的表達(dá)；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)腎上腺素受體亞型在HSCS的分布與定位；REALTIMEQPCR檢測(cè)HSCS腎上腺素受體ΑAR、Β1AR及Β2ARMRNA的表達(dá)。細(xì)胞干預(yù)分為以下6組①空白對(duì)照組，為單純HSCS培養(yǎng)；②交感興奮組NE；③ΑAR阻滯組酚妥拉明；④Β1AR阻滯組CGP20712A；⑤Β2AR阻滯組ICI118551；⑥交感抑制組酚妥拉明普萘洛爾。MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖；TUNEL法觀察HSCS凋亡狀況；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及凋亡調(diào)控基因BAX和BCL2的變化；REALTIMEQPCR檢測(cè)Ⅰ型膠原MRNA的表達(dá)；并用WESTERNBLOT和REALTIMEQPCR檢測(cè)MMP13和TIMP1蛋白和MRNA的表達(dá)。結(jié)論HSCS可以表達(dá)ΑAR、Β1AR和Β2AR腎上腺素受體蛋白和MRNA，主要分布于HSCS的細(xì)胞膜和細(xì)胞漿。ΑAR、Β1AR和Β2AR特異性阻滯劑均可以抑制HSCS增殖、誘導(dǎo)其凋亡。并可以拮抗NE引起的凋亡基因的變化，使BAX表達(dá)下降，BCL2表達(dá)升高。其中，ΑAR阻滯劑酚妥拉明和Β2AR阻滯劑ICI118551效果最明顯。NE受體阻滯劑促進(jìn)HSCSMMP13表達(dá)，顯著降低TIMP1表達(dá)，MMP13TIMP1比值回升；Ⅰ型膠原MRNA表達(dá)亦明顯降低。第四部分NE調(diào)控HSCS生物學(xué)行為的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制目的探討交感神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素對(duì)肝星狀細(xì)胞生物學(xué)行為影響的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。方法體外培養(yǎng)HSCS，加入PI3K信號(hào)通路抑制劑LY294002，用四甲基偶氮唑鹽MTT法檢測(cè)NE對(duì)HSCS增殖的影響；TUNEL法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡情況；WESTERNBLOT檢測(cè)PI3K蛋白表達(dá)的變化情況。結(jié)果①NE促進(jìn)HSCS增殖，加入PI3K信號(hào)通路抑制劑LY294002后細(xì)胞增殖受抑制；②NE作用于HSCS24H，TUNEL法和流式細(xì)胞術(shù)均證實(shí)HSCS凋亡率顯著低于對(duì)照組，加入PI3K信號(hào)通路抑制劑LY294002后HSCS凋亡率升高1440％±451％VS660％±305％BYTUNEL，P＜005；504％±144％VS229％±022％BYFCM，P＜005；③加入PI3K信號(hào)通路抑制劑LY294002后，WESTERNBLOT證實(shí)PI3K蛋白表達(dá)減少。結(jié)論交感神經(jīng)遞質(zhì)NE可以促進(jìn)HSCS增殖，抑制HSCS凋亡，與PI3K信號(hào)通路相關(guān)。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多HBV X基因?qū)02肝細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及阿霉素干預(yù)HBx調(diào)控L02肝細(xì)胞凋亡的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：很多研究表明，骨質(zhì)疏松導(dǎo)致的頜骨骨量減少是口腔種植失敗的重要原因之一，因此，有效的防治骨質(zhì)疏松成為口腔醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。全身用藥雖然可以增加頜骨的骨密度，從而提高種植體成功率，但弊端也很大。為此，劉洪臣提出的人工種植牙給藥系統(tǒng)為防治骨質(zhì)疏松和提高種植體成功率提供了很好的途徑。在治療骨質(zhì)疏松藥物中，雌二醇及依普黃酮聯(lián)合應(yīng)用有望成為理想的治療藥物，所以本實(shí)驗(yàn)通過研究骨質(zhì)疏松患者種植體周圍靶細(xì)胞骨質(zhì)疏松頜骨成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的變化和雌二醇及依普黃酮對(duì)其的影響，為人工種植牙給藥系統(tǒng)提供一定的實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。第一部分、骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型的建立和頜骨與全身骨質(zhì)疏松的關(guān)系。目的建立絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型，研究頜骨骨質(zhì)疏松與全身的關(guān)系。方法采用摘除大鼠雙側(cè)卵巢的方法建立動(dòng)物骨質(zhì)疏松模型，通過檢測(cè)體重、股骨腰椎骨密度、血清指標(biāo)的方法確定骨質(zhì)疏松模型是否建立。通過檢測(cè)頜骨骨密度和組織切片判斷頜骨骨質(zhì)疏松的情況。結(jié)果在術(shù)后4W時(shí)，OVX組的大鼠體重比SHAM組顯著增加，腰椎和股骨出現(xiàn)骨密度下降，血清中鈣出現(xiàn)降低，而堿性磷酸酶和骨鈣素出現(xiàn)了升高。下頜骨在術(shù)后4W先出現(xiàn)升高，上頜骨在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中未出現(xiàn)顯著的骨密度變化，但是兩者在術(shù)后均呈現(xiàn)了降低的趨勢(shì)。HE組織切片顯示下頜骨OVX組骨小梁明顯減少，排列稀疏。結(jié)論骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型成功建立，頜骨的變化與全身骨質(zhì)疏松有關(guān)。第二部分、去勢(shì)后下頜骨成骨細(xì)胞增殖分化能力的變化。目的探討大鼠術(shù)后4W和12W下頜骨成骨細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及增殖分化礦化能力的變化。方法采用酶消法和組織塊法聯(lián)合培養(yǎng)成骨細(xì)胞，用堿性磷酸酶染色、Ⅰ型膠原染色和茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色鑒定成骨細(xì)胞。通過檢測(cè)成骨細(xì)胞的增殖、堿性磷酸酶、骨鈣素、鈣磷鎂的吸收和鈣結(jié)節(jié)比較增殖分化能力的變化。采用RTPCR和WESTERNBLOT的方法檢測(cè)PCNA基因蛋白的表達(dá)。用透射電鏡觀察成骨細(xì)胞微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果所培養(yǎng)細(xì)胞堿性磷酸酶、Ⅰ型膠原和茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色均為陽(yáng)性。術(shù)后4WOVX組成骨細(xì)胞增殖能力和堿性磷酸酶活性就出現(xiàn)了明顯的升高；術(shù)后12W時(shí)OVX組成骨細(xì)胞增殖能力、堿性磷酸酶活性、骨鈣素、PCNA基因蛋白的表達(dá)均比SHAM組高。透射電鏡的結(jié)果顯示12W的OVX組成骨細(xì)胞線粒體和異染色質(zhì)明顯增多，而SHAM組溶酶體等黑色顆粒和白色小泡較多。結(jié)論大鼠去勢(shì)后下頜骨成骨細(xì)胞的增殖分化能力出現(xiàn)了明顯增加。第三部分、去勢(shì)后下頜骨成骨細(xì)胞職和UCP2表達(dá)的變化目的探討術(shù)后4W和12W下頜骨成骨細(xì)胞ER和UCP2的表達(dá)。方法采用RTPCR和WESTERNBLOT檢測(cè)ER和UCP2的表達(dá)變化。結(jié)果成骨細(xì)胞表達(dá)了UCP2，且OVX組表達(dá)的UCP2比SHAM組明顯減少。ER在OVX組的基因表達(dá)高于SHAM組。結(jié)論成骨細(xì)胞ER和UCP2表達(dá)的改變可能與骨質(zhì)疏松增殖分化能力變化的機(jī)制有關(guān)。第四部分、依普黃酮及雌二醇對(duì)骨質(zhì)疏松成骨細(xì)胞生物學(xué)活性的影響。目的探討雌二醇及依普黃酮聯(lián)合作用對(duì)骨質(zhì)疏松性成骨細(xì)胞增殖分化的影響和相關(guān)基因蛋白的表達(dá)。方法檢測(cè)不同藥物濃度對(duì)于骨質(zhì)疏松成骨細(xì)胞的增殖能力和堿性磷酸酶的影響，確定最大促進(jìn)作用的藥物濃度，用RTPCR和WESTERNBLOT方法檢測(cè)藥物對(duì)于UCP2、PCNA和ER表達(dá)的影響。結(jié)果所選濃度的雌二醇和依普黃酮均可以增加骨質(zhì)疏松性成骨細(xì)胞的增殖分化能力，未見抑制現(xiàn)象。并且兩種藥物均促進(jìn)UCP2和PCNA的表達(dá)，但聯(lián)合用藥時(shí)表達(dá)并沒有相互加強(qiáng)。依普黃酮抑制ERΑ表達(dá)，促進(jìn)ERΒ表達(dá)，兩者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)ER的表達(dá)無明顯作用。結(jié)論所選濃度的雌二醇及依普黃酮均起到促進(jìn)骨質(zhì)疏松成骨細(xì)胞增殖分化的作用，未見抑制作用。并且藥物對(duì)PCNA、UCP2和ER的表達(dá)也有影響，兩藥之間具體的作用機(jī)制并不清楚。

簡(jiǎn)介：上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文RHOA在胃癌細(xì)胞生物學(xué)行為和氧化應(yīng)激促進(jìn)凋亡中的作用姓名蔡軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師易靜20070501上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文2NFKB的激活在胃癌SGC7901細(xì)胞發(fā)揮促生存抗凋亡的作用；活化RHOA促進(jìn)NFKB與DNA的特異結(jié)合，加強(qiáng)NFKB的促轉(zhuǎn)錄活性，ROCK抑制劑Y27632部分逆轉(zhuǎn)這一作用。砷劑聯(lián)用大黃素引起的氧化應(yīng)激抑制NFKB與DNA的特異結(jié)合，阻止NFKB促進(jìn)下游基因的表達(dá)。3活化的RHOA通過對(duì)ACTIN的裝配和VINCULIN的分布的影響，使細(xì)胞具有抗ANOIKIS的作用，砷劑聯(lián)用大黃素作用后，抑制了RHOA的活性，引起細(xì)胞黏附復(fù)合體的崩解，使腫瘤細(xì)胞形態(tài)改變，黏附減弱，凋亡明顯增加。結(jié)論RHOA促進(jìn)胃癌細(xì)胞增殖，具有抗凋亡作用，其機(jī)制通過促進(jìn)NFKB的激活和抗ANOIKIS的作用，活化RHOA促進(jìn)黏附斑復(fù)合體的穩(wěn)定性。其中，促進(jìn)NFKB的激活途徑部分依賴于RHOA下游效應(yīng)分子ROCK。砷劑聯(lián)用大黃素引起氧化應(yīng)激促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡，其作用機(jī)制涉及對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性RHOA的抑制，繼而引起細(xì)胞黏附斑復(fù)合體的崩解。關(guān)鍵詞RHOA，氧化應(yīng)激，ANOIKIS，NFKB，胃癌細(xì)胞

簡(jiǎn)介：MIR一520B對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其分子機(jī)制研究論文作者簽指導(dǎo)教師簽名論文評(píng)閱人1評(píng)閱人2評(píng)閱人3評(píng)閱人4評(píng)閱人5匿名評(píng)閱匿名評(píng)閱匿名評(píng)閱匿名評(píng)閱答辯委員會(huì)主席陵昭典教援逝江太堂醫(yī)堂院附屬箍二醫(yī)院蠆員1昌伯壅教援逝塹生醫(yī)藥太堂附屬箍三醫(yī)院委員2杜佳堊主任醫(yī)婭浙江太堂醫(yī)堂隨附屬筮三醫(yī)院委員3撻耋送主任醫(yī)匝蟲國(guó)厶民鯉趑至箍二二土醫(yī)院委員4選拍垡主任醫(yī)婭逝江太堂匡堂院附屬箍二醫(yī)院委員5汪朔主任醫(yī)埡浙、江太堂醫(yī)堂院附屬箍二醫(yī)院委員6金曉丕主任醫(yī)婭逝江太堂醫(yī)堂院隘屬箍二醫(yī)院答辯日期2014年11月27日HOSPITAL，COLLEGEOFMEDICAL，ZHEJIANGUNIVERSITYCOMMITTEEMAN5WANGSHUOCHIEFCONSULTANTTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITAL，COLLEGEOFMEDICAL，ZHANGUNIVERSITYCOMMITTEEMAN6JINXIAODONGCHIEFCONSULTANTTHEFIRSTAFFILIATEDHOSPITAL，COLLEGEOFMEDICAL，ZHANGUNIVERSITYDATEOFORALDEFENCE27NOV2014

簡(jiǎn)介：天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文ARF缺失與腫瘤細(xì)胞MDMX異常調(diào)控的分子生物學(xué)機(jī)制姓名李小龍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)；腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師郝希山201205天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文ABSTRACTMDMXISAHETERODIMERICPARTNEROFMDM2ANDACRITICALREGULATOROFP53THEMDMXLEVELISGENERALLYELEVATEDINTUMORSWITHWILDTYPEP53ANDCONTRIBUTESTOP53INACTIVATIONMDMDDEGRADATIONISCONTROLLEDINPARTBVMDM2MEDIATEDUBIQUITINATIONHEREWESHOWTHATⅣIDⅣⅨTURNOVERISHIGHLYRESPONSIVETOCHANGESINMDM2LEVELINNONTRANSFORMEDCELLSBUTNOTINTMNORCELLSWEFOUNDTHAT10SSOFALTEMATEREADINGFRAMEARFEXPRESSION，WHICHOCCURSINMOSTTUMORS謝THWILDTYPEP53SIGNIFICANTLYREDUCESMDMXSENSITIVITYTOMDM2RESTORATIONOFAI江EXPRESSIONINTUMORCELLSENABLESMDM2TODEGRADEMDMXINADOSEDEPENDENTMANNERARFBINDSTOMDⅣ【2ANDSTIMULATESASECONDSITEINTERACTIONBETWEENTHECENTRALREGIONOFMDM2ANDMDMXANDTHUSINCREASESMDMX_】ⅥDM2BINDINGANDMDMXUBIQUITINATIONTHESERESULTSREVEALANIMPORTANTABNORMALITYINTHEP53REGULATORYPATHWAYASACONSEQUENCEOFAI邛DEFICIENCYLOSSOFARFDURINGTUMORDEVELOPMENTNOTONLYPREVENTSP53STABILIZATIONBYPROLIFERATIVESTRESSBUTALSOCAUSESACCUMULATIONOFMDⅣTHATCOMPROMISESP53ACTIVITYTHISPHENOMENONMAYREDUCETHECLINICALEFFICACYOFMDM2一SPECIFICINHIBITORSBYPREVENTINGMDMXDOWNREGULATIONKEYWORDSMDM2MDMXARFP53UBIQUITINATIONNUTLINII

簡(jiǎn)介：本文聚焦空間結(jié)構(gòu)對(duì)成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響，探討真皮替代物減少瘢痕形成的機(jī)制。方法取清潔級(jí)SD大鼠30只，把松質(zhì)骨和密質(zhì)骨植入大鼠背部皮下和肉膜層之間，進(jìn)行HE染色，同時(shí)檢測(cè)ΑSMA的表達(dá)，動(dòng)態(tài)觀察有無三維結(jié)構(gòu)和三維結(jié)構(gòu)是否均勻?qū)Τ衫w維細(xì)胞的影響。另外9只大鼠將整塊絲素膜和絲素膜碎片，分別植入背部皮下和肉膜層之間，進(jìn)行HE染色，檢測(cè)ΑSMA的表達(dá)，觀察三維結(jié)構(gòu)的完整性和連續(xù)性對(duì)成纖維細(xì)胞的影響；其余12只大鼠在背部皮下和肉膜層之間，觀察術(shù)后1周、2周和3周成纖維細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，同時(shí)檢測(cè)ΑSMA、BFGF、PCNA的表達(dá)及細(xì)胞凋亡，觀察不同三維結(jié)構(gòu)對(duì)成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。在體外實(shí)驗(yàn)中，把來源于人包皮的成纖維細(xì)胞接種至孔徑分別為200UM和1000UM的膠原膜內(nèi)，于1周和2周取材，進(jìn)行動(dòng)態(tài)組織學(xué)觀察。結(jié)論1空間形態(tài)結(jié)構(gòu)的存在能夠影響成纖維細(xì)胞的形態(tài)及其功能；2完整、連續(xù)和均勻的空間形態(tài)結(jié)構(gòu)有利于調(diào)控成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為，從而減少瘢痕的形成；3太小和太大的空間形態(tài)結(jié)構(gòu)都不利于成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的正常調(diào)控，只有比較適合成纖維細(xì)胞的空間形態(tài)結(jié)構(gòu)，才能使其生物學(xué)行為沿著有利于減少瘢痕增生的方向發(fā)展；4在創(chuàng)面愈合過程中，通過完整的空間形態(tài)結(jié)構(gòu)來影響成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為，可能是真皮模板抑制瘢痕形成、改善愈合質(zhì)量的機(jī)制之一。